不同钾水平下花魔芋差异表达基因分析

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1、研究论文中国蔬菜CHINAVEGETABLES2016（4）：38-41不同钾水平下花魔芋差异表达基因分析11，2，311211，2曾黎琼　韩蓉蓉　段玉云　陈　玲　文亦芾　李娥贤　姜　飞1（云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所，云南省农业生物技术重点实验室，农业部西南作物基2因资源与种质创制重点实验室，云南昆明650223；云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明650201；3西南大学动物科技学院，重庆400715）摘　要：为了探索魔芋对不同水平钾素营养的反应机制，提取施用低、中、高水平硫酸钾5d后的富源花魔芋叶片总RNA，合成了cDNA，采用优化的cDNA-SRAP技术体系

2、分析了在低钾、中钾、高钾水平下富源花魔芋叶片的差异表达基因，并对其进行了生物信息学分析。结果显示：29对引物组合共扩增出507条基因片段，其中差异片段126条。相对于中钾处理，低钾、高钾处理的差异片段包括抑制型表达片段19条，诱导型表达片段14条，上调表达型片段29条，下调表达型片段64条。选取表达量高的13条差异片段进行回收测序，并在NCBI上进行BLAST比对，共比对出9条差异片段的同源序列，其中4条与已知功能基因（谷氨酰胺酰-tRNA合成酶、β-ATP合成酶、GTP结合蛋白、核苷酸还原酶）有较高同源性，5条与假定基因或预测基因同源性较高，剩余序列未找到同源序列，可能是一些新的魔芋与钾营

3、养吸收利用相关的基因，具体功能还有待于进一步研究。关键词：富源花魔芋；cDNA-SRAP；基因表达；钾水平魔芋（Amorphophalluskonjac）是天南星科魔为材料，利用cDNA-SRAP技术研究在低钾、高钾芋属多年生草本植物，球茎富含葡甘露聚糖，是我胁迫下展叶期富源花魔芋基因表达差异性，为筛选国重要的经济作物，在食品、医药、环保、化工、和鉴定富源花魔芋钾高效吸收利用基因、认识魔芋建筑等领域有着广泛的用途。富源花魔芋是云南魔钾营养吸收利用的分子机制以及魔芋的生物技术育芋生产中的主栽品种，段玉云等（2015）研究表明，种奠定基础。富源花魔芋是一种喜钾作物，对钾素营养有较强的1　材料与方法

4、吸收能力，钾素营养水平影响其产量和品质。SRAP（sequence-relatedamplifiedpolymorphism）1.1　试验材料　即相关序列扩增多态性，该技术操作简便、重复性供试富源花魔芋：采自云南省农业科学院生好，近年来广泛应用于植物遗传多样性分析、分子物技术与种质资源研究所温室，种植方式为盆栽。遗传图谱构建、重要性状基因定位、亲缘关系鉴试验药剂：RNAprepPure多糖多酚植物总RNA提定、分子标记辅助选育等方面（Yvesetal．，2010；取试剂盒、FastQuantcDNA第一链合成试剂盒、Muhammadetal．，2011；卢超等，2014）

5、。cDNA-MarkerDL2000购于天根生化科技（北京）有限SRAP技术目前已在甘蔗（吴建明等，2010）、公司；dNTP、Taq聚合酶购于Thermo公司；引物蜡梅（赵凯歌等，2012）、棉花（陈沙沙等，（表1）由生工生物工程（上海）股份有限公司合2013）、甘蓝（张云霞等，2014）等作物的基因表成，其他一般试剂为国产分析纯。主要试验仪器：达分析中得到应用，成为了一种新的转录基因组学离心机（Eppendorf5417R），DNA扩增仪（Biometra研究工具。本试验以云南魔芋主栽品种富源花魔芋TprofessionalPCR仪），电泳仪（北京六一DYY-6C型号），

6、凝胶成像系统（SyngeneGeneGenius），曾黎琼，女，研究员，专业方向：农作物生物技术，E-mail：紫外分光光度计（ThermoNanoDrop2000分光光liqiongzeng@sina.com收稿日期：2015-10-14；接受日期：2016-02-26度计）。—38—《中国蔬菜》学术论文下载www.cnveg.org中国蔬菜CHINAVEGETABLES研究论文表1　引物序列用优化的cDNA-SRAP反应体系对低钾、中钾、编号正向引物（5′-3′）编号反向引物（5′-3′）高钾3个处理的富源花魔芋样品进行分析。cDNA-ME3TGAGTCCAAACCGGA

7、ATEM1GACTGCGTACGAATTAATSRAPPCR扩增反应程序同1.2.2。扩增产物采用6%ME4TGAGTCCAAACCGGACCEM2GACTGCGTACGAATTTGCME5TGAGTCCAAACCGGAAGEM3GACTGCGTACGAATTGAC聚丙烯酰胺凝胶进行电泳检测。ME6TGAGTCCAAACCGGTAAEM4GACTGCGTACGAATTTGA1.2.4　差异片段的