过硫酸氢钾复合盐消毒作用实验研究

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1、过硫酸氢钾复合盐消毒作用实验研究过硫酸氢钾复合盐是国内新近生产的一种非氯氧化消毒剂，其水溶液接近中性，溶解水后产生各种高能量、高活性的小分子的自由基、活性氧衍生物等过氧化氢的衍生物，能破坏微生物细胞膜的通透性屏障，使细胞内容物流失，丧失能量依赖性膜运输系统的功能，并且可与核酸中金属离子如钙、铁等结合，产生自由·OH基，作用于DNA的磷酸二酯键而导致其断裂［1］。对RNA亦有类似的破坏作用［2］。过硫酸氢钾复合盐作为水处理消毒剂具有很强的氧化能力，可以杀灭水中微生物，去除污水中的有机物，其代谢产物仅使水中的K+、SO24+有少许增加，

2、不会对人类和环境带来影响［3］。为观察验证其消毒效果，对过硫酸氢钾复合盐的消毒作用进行了实验研究。1 材料与方法1.1材料1.1.1过硫酸氢钾复合盐 白色颗粒结晶，以三合盐的形式组合，分子式为:2KHSO5-KHSO5-K5SO4，分子量为614.7，为一种无机化合物，浙江省上虞洁华化工有限公司产品，其有效成分含量约为70%-75%。消毒时浓度为10-160mg/L。1.1.2供试菌种 金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、绿脓杆菌（ATCC2027）、枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）、大肠杆菌（ATCC8040）。以上菌种均购自

3、中国菌种保藏中心，由黑龙江省佳木斯大学基础医学院微生物教研室保藏。1.1.3 HBsAg阳性血清用ELISA法检测，滴度为1:4096，由黑龙江省佳木斯大学第一附属医院检验科提供。1.1.4 培养基普通肉汤培养基 配方为［4］]牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，水1000ml，PH=7.4~7.6。改良沙氏肉汤培养基，参照文献［4］自配。1.1.5 实验动物 黑龙江省佳木斯大学实验动物中心提供。1.2试验方法1.2.1中和剂选择试验［5］ 试验菌为大肠杆菌与金黄色葡萄球菌。中和试验设6个试验组：①消毒剂+菌悬液；②

4、消毒剂+菌悬液）+中和剂；③中和剂+菌悬液；④（消毒剂+中和剂）+菌悬液；⑤磷酸盐缓冲液（PBS）+菌悬液；⑥未接种菌的培养基对照。试验结果，当第6组不长菌，第3、4、5组组间菌数相差不超过10%，第1组不长菌或长菌数远少于第2组，第2组长菌数超过100cfu/ml时，为所选中和剂浓度。1.2.2 悬液定量杀菌试验 试验菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌与枯草杆菌黑色变种芽孢将0.5ml菌悬液与45ml消毒液混匀，作用至预定时间，取0.5ml菌药混合液，加入45ml中和剂中，混匀。中和作用5min，取该液0.5ml接种平皿，倾

5、注普通营养琼脂并混匀。于37℃培养48h，计数菌落数，计算杀灭率。1.2.3 乙肝病毒表面抗原破坏试验 用含5%小牛血清的ABS将纯化乙肝病毒表面抗原稀释成其含量为试剂灵敏度50000倍，50ul加入反应孔中，加入50ul消毒液使其终浓度分别达到40,80,160ml/L，作用不同时间。阴性对照为含5%小牛血清PBS。用ELISA法检测HBsAg抗原性，以试验组OD值（S）与阴性对照OD值（N）的比值（S/N）>2.1判为HBsSg灭活有效。2 结果2.1 中和剂试验以含40mg/L过硫酸氢钾复合盐加大肠杆菌、金黄色葡萄球菌后作用5

6、min后，加中和剂作用5min观察中和作用。所选中和剂为1%硫代硫酸钠。结果见表1。表1 消毒剂中和试验结果 组 别试验菌金黄色葡萄球菌（cfu/ml）大肠杆菌(cfu/ml)（消毒剂+中和剂）+菌悬液31000001112000中和剂+菌悬液31000001120000（消毒剂+菌悬液）+中和剂139260消毒剂+菌悬液00对照31600001200000注：试验温度为20℃，结果为3次平均值。2.2 悬液定量消毒试验10~40mg/L过硫酸氢钾复合盐对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭率均为100%，对白色念珠菌的杀灭率均大于99.

7、50%。但未观察到对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭作用。结果表2。表2 过硫酸氢钾对悬液中细菌的杀灭效果试验菌株过硫酸氢钾浓度（mg/L）对照组平均菌数（cfu/ml）试验组残留菌落数（cfu/ml）平均杀灭率 (%)大肠杆菌404.5×1070100.00200100.00100100.00金黄色葡萄球菌402.2×1070100.00202099.999103099.998白色念珠菌402.2×1075599.90209399.9710200099.58枯草芽孢杆菌变种405.3×1075.3×1070205.3×1070105.3

8、×10702.3       过硫酸氢钾复合盐对HBsAg表面抗原灭活试验 结果见表3。表3 过硫酸氢钾复合盐对乙肝病毒表面抗原灭活试验过硫酸氢钾复合盐浓度（ml/L）不同时间作用结果(min)