GBT7650-1987谷物籽粒色氨酸测定法.pdf

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1、中华人民共和国国家标准UDC633.1-543-06GB7650一87谷物籽粒色氨酸测定法Determinationoftryptophanincerealgrains适用范围本标准适用于测定谷物籽粒色氨酸含量。原理谷物蛋白质碱解后，降解成肤和游离的氨基酸。在酸性介质中，有硝酸盐存在条件下，色氨酸叫噪环与对二甲胺基苯甲醛反应，生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。3仪器、设备3.1分析夭平，感量。.1mg,3.2实验室用粉碎机。3.5721型分光光度计，或相当的仪器。3.4离心机，4000r/m

2、in,3.5培养箱。3.620ml具塞刻度玻璃试管(须校准).4试剂除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。4.1浓盐酸(GB622-77)，比重1.19,4.210%盐酸溶液:22.7ml浓盐酸加水至IOOMI,4.35%对二甲胺基苯甲醛(HGB3486-62)溶液:5g对二甲胺基苯甲醛溶于10外盐酸中，并定容100m1,4.41写硝酸钠(GB636-77)水溶液(m/V),注:咯℃冰箱中保存，一周内使用有效。4.510%氢氧化钾(GB2306-80)水溶液(m/V),4.6L一色氨酸，层析纯.4.7L一色氨酸标准溶

3、液:准确称25mgL一色氨酸(105"C干操2h)，加少量0.Imol/L氢氧化钠(GB629-91)使之溶解，定It地转移到250m!棕色容量瓶中，用水定容。浓度为100ug/mi,注:4℃冰箱中保存，一个月内使用有效.5试样的选取与制备5.1选取具有代表性谷物籽粒，挑拣干净，按四分法缩减取样，样量不得少于20g。籽粒充分风干后用粉碎机磨碎(带壳籽粒先脱壳)，使95以上通过。.25mm孔径筛。6.2按GB2906-82《谷类、油料作物种子粗脂肪测定法》脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风千后·混匀，装入磨口瓶中备用.

4、中华人民共和国农牧渔业部1987一03一26批准1987一11一15实施GB7650一876校准曲线的绘制吸L一色氨酸标准溶液0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml分别置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加lml10%氢氧化钾溶液，摇匀;加0.2ml5%对二甲胺基苯甲醛，摇匀;加。.2ml1%硝酸钠，摇匀;将试管置于冰水中，再加5ml浓盐酸。取出试管，强烈振摇后放入25℃培养箱中显色75min温度升到25℃时记时)，取出后用水稀释至刻度，摇匀。以试剂空白作对照在590nm波长处测读吸光度。以色氨酸含量(1

5、8)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。在温度较高的季节和地区，制定校准曲线时，参见附录Ae7测定步驻7.1称样:称取40mg试样两份，准确至0.lmg，与此同时，另称样品，按GB3523-83《谷类、油料作物种子水分测定法》测定水分含量。7.2水解:将试样置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加lml10%氢氧化钾，振摇，祥品全部湿润后，放入40℃培养箱中水解16-18h.7.3显色:从培养箱中取出试管冷至室温后加0.2ml5%对二甲胺基苯甲醛，摇匀。加0.2ml1%硝酸钠，摇匀;将试管置于冰水中，再加5m1浓盐

6、酸。取出试管，强烈振摇后置于40℃培养箱中显色45min(温度升到40℃时记时)。7.4测定:取出试管冷至室温后，用水稀释至刻度，摇匀。以4000r/min离心lOmin。取上清液以试剂空白作对照，在590nm波长处测读吸光度。8结果计算8.1计算公式aX10"色氨酸，%①(干基)二义100m(1一H)式中:。—试样质量,mgt。—从校准曲线上查得的色氨酸含量,181H—试祥水分百分率.8.2结果的衰示两个平行样品的测定结果用算术平均值表示，保留有效数字两位，第三位数按GB1.1-81《标准化工作导则编写标准的一

7、般规定》附录C规定取舍。8.3允许理两个平行样品色氨酸测定值为。.10%以下时，相对差允许为8%;0.10%或0.10%以上时为5%o①为脱脂试样的色氮酸百分含A.换算成原样品的色氨酸含量应乘以系数0一脂肪%)。如脂肪含量为4%以下时，二个结果在允许差之内。GB7650一87附录A(参考件)在温度较高的季节和地区，制定校准曲线时，L一色氨酸标准溶液的显色条件可采用30"C60min,测定结果与25"C75min一致。附加说明:本标准由中国农业科学院分析室负责起草。本标准主要起草人崔淑文。