GSH对低温胁迫下枇杷幼果叶绿体AsA-GSH循环代谢的影响毕业论文

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1、GSH对低温胁迫下枇杷幼果叶绿体AsA-GSH循环代谢的影响毕业论文目录0引言21材料与方法21.1供试材料21.2主要试剂与仪器21.3测定项目与方法21.4数据分析32结果与分析32.1GSH对低温胁迫下枇杷幼果叶绿体GSH含量的影响32.2GSH对低温胁迫下枇杷幼果叶绿体AsA含量的影响32.3GSH对低温胁迫下枇杷幼果叶绿体中MDHAR活性的影响33讨论34结论4致谢4参考文献4附录5枇杷（EriobotryaJaponicaLindl）是福建省的地方名特优果品。[1]枇杷品种为耐寒性较差的热

2、带型品种，低温胁迫是热带型枇杷品种生长的关键限制性因子。近年我国南方山地枇杷产区都有不同程度的冻害发生。热带型枇杷在我国现有枇杷栽培面积和产量中占有较大的比重，研究当前枇杷生产上存在枇杷幼果受冻的突出问题以减少因冻害造成的损失具有一定的实际意义和理论价值。谷胱甘肽(GSH)是植物体内普遍存在的还原性物质，在防御自由基对膜脂的过氧化中起到重要作用。相关研究表明，生物膜是低温胁迫对植物造成伤害的原初作用部位和反应部位，临界低温下膜上类脂发生由液晶相向凝胶相的转变，并引发如膜透性增大和膜结合酶活化能增高等继

3、发反应，导致组织不可逆伤害的发生。[2,3]关于GSH对低温胁迫下枇杷幼果叶绿体AsA-GSH循环代谢影响的研究未见相关报道。本试验拟采用不同质量浓度的外源GSH处理低温胁迫下枇杷幼果，探讨外源GSH处理对叶绿体AsA-GSH循环代谢的影响，以期为GSH在提高枇杷幼果抗寒性方面的应用提供理论依据。51材料与方法1.1供试材料以“早钟6号”三年生枇杷容器苗为试材，选取长势一致、无病虫害与损伤、生长正常、花后60d的枇杷容器苗(已疏果)，以100、300、400和500mg·L-1等不同质量浓度的GSH(

4、分别在表中标记为T1、T2、T3与T4)溶液100mL均匀喷施于叶面和幼果，以无低温胁迫喷清水处理为对照1(CK1)，以低温胁迫加喷清水处理为对照2(CK2)。每个处理5株。将经GSH处理和CK2容器苗置于人工气候室-3℃低温下处理6h，后于室温下平衡10h，迅速取下幼果经液氮速冻后保存于-40℃低温冰箱，待测相关指标，见表1。表1试验条件GSH质量浓度（mg·L-1）溶液标记对照1对照2备注100T1………300T2………400T3………500T4………5注：以无低温胁迫喷清水处理为对照1(CK1)

5、，以低温胁迫加喷清水处理为对照2(CK2)1.2主要试剂与仪器本试验使用的牛血清白蛋白(Albumin，FractionV）、磷酸缓冲液、三氯乙酸(TCA)、考马斯亮蓝G-250、30%过氧化氢、L-半胱氨酸、β-巯基乙醇、乙二胺四乙酸(EDTA)、Tris-HCl缓冲液、还原型谷胱甘肽(GSH)、抗坏血酸(AsA)和NaCl等试剂为国产分析纯或生物级试剂。主要仪器有：MDF-U4086S型超低温冰箱(日本三洋)、5415R型Eppendorf冷冻离心机(德国产)和Eppendorf移液枪(德国产)等

6、。1.3测定项目与方法1.3.1叶绿体的制备参考崔彬彬等(2006)的方法提取完整叶绿体[10]。以缓冲液(含0.05mol·L-1的磷酸缓冲液PBS，5.0mmol·L-1的EDTA，pH7.8)悬浮叶绿体，用于测定APX、GR、MDHAR和DHAR活性以及GSH和AsA含量。1.3.2GSH和AsA含量测定取叶绿体悬浮液1.0mL，加1.5mL蒸馏水和5%三氯乙酸溶液2.5mL混匀，于6600rpm离心10min，上清液定容至5.0mL，用于测定GSH含量，GSH含量测定参照Ellman(1959

7、)的方法。取叶绿体悬浮液1.0mL于2600rpm离心10min，沉淀用于制备10%叶绿体匀浆液(叶绿体重量/生理盐水体积为1:9)，用于测定AsA含量，AsA的测定参照陈建勋等(2002)的方法。[4]51.4数据分析上述测定均设3次独立试验，每次3个重复。测定所得数据经Duncan’s新复极差法进行方差分析,检验差异显著性。52结果与分析2.1GSH对低温胁迫下枇杷幼果叶绿体GSH含量的影响谷胱甘肽是植物体内重要的抗氧化剂与氧化还原势的调节剂。由图1可知，经GSH处理的枇杷幼果叶绿体中GSH含量均

8、高于CK2，差异达显著水平(P＜0.05)。说明GSH处理可提高低温胁迫下枇杷幼果叶绿体中GSH的含量，其中以100mg·L-1的GSH处理的枇杷幼果叶绿体GSH含量极显著高于CK1和CK2以及300mg·L-1和500mg·L-1的GSH处理(P＜0.01)。CK1枇杷幼果叶绿体的GSH含量高于CK2，差异达显著水平(P＜0.05＝，表明低温胁迫降低了枇杷幼果叶绿体GSH含量。2.2GSH对低温胁迫下枇杷幼果叶绿体AsA含量的影响AsA在APX的参与下