DB50∕T 1251-2022 杂交狼尾草青贮质量评定(重庆市)

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ICS65.120CCSB25DB50重庆市地方标准DB50/T1251—2022杂交狼尾草青贮质量评定2022-06-01发布2022-09-01实施重庆市市场监督管理局发布

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2DB50/T1251—2022前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由重庆市农业农村委员会提出并归口。本文件起草单位：重庆市畜牧科学院、西南民族大学。本文件主要起草人：何玮、冉启凡、陈静、关皓、范彦、徐远东、朱瑞芬、向白菊、何德超。I

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4DB50/T1251—2022杂交狼尾草青贮质量评定1范围本文件规定了杂交狼尾草（Pennisetumamericanum×P.purpureum）青贮质量评定的术语和定义、技术要求、检测方法。本文件适用于杂交狼尾草青贮饲料的质量评定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6432饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法GB/T6435饲料中水分的测定GB10468水果和蔬菜产品pH值的测定方法GB13078饲料卫生标准NY/T2129饲草产品抽样技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1杂交狼尾草hybridpennisetum为禾本科狼尾草属暖季型牧草，由二倍体美洲狼尾草（Pennisetumamericanum）与四倍体象草（P.purpureum）杂交育成的三倍体种间杂交种。适于鲜喂牛羊或青贮利用。3.2青贮饲料silage将新鲜的青绿饲料切短后，在密闭缺氧的条件下经微生物发酵，制成的一种具有特殊芳香气味、营养丰富的多汁饲料。[来源：DB50/T669，3.1]3.3水分moisture按照GB/T6435规定的步骤干燥样品所损失物质（水分和其他挥发性物质）的质量。[来源：GB/T6435，3.1]4技术要求1

5DB50/T1251—20224.1感官评定杂交狼尾草青贮饲料感官分级指标包括色泽、质地、气味、含水量，按照表1的指标进行判定。以4项指标单项得分之和作为分级依据，总分100分。青贮饲料感官评分100分～81分为优良，80分～61分为中等，60分～41分为较差，40分～0分为差。表1杂交狼尾草青贮饲料感官评分色泽（25分）气味（30分）质地（20分）含水量（25分）项目得分项目得分项目得分项目得分抓握，松开后样品黄绿色，有光松散软，茎、19～25酸香味，舒适23～3016～20缓慢散开，手掌上17～25泽叶分辨明显有少量水分附着抓握，松开后样品醋酸味强，酸柔软，茎、叶黄色，有光泽13～1814～228～15成球状，可形成水9～16香味弱分辨明显滴抓握，松开后样品黄色，黄褐色，茎、叶略能分1～12刺鼻酸味1～131～7成球状，水分从指1～8色泽暗辨间流出酸臭腐败霉烂茎、叶黏连成样品黏连成团，滴黑褐色0000味团或干燥粗硬水4.2发酵评定杂交狼尾草青贮饲料发酵分级指标包括pH值、氨态氮/总氮、乳酸/总酸、乙酸/总酸、丁酸/总酸，按照表2的指标设定进行判定。以5项指标单项得分之和作为分级依据，总分100分。评分100分～81分为优良，80分～61分为中等，60分～41分为较差，40分～0分为差。表2杂交狼尾草青贮饲料发酵评分氨态氮/总氮乳酸/总酸乙酸/总酸丁酸/总酸pH值%%%%（20分）（30分）（25分）（15分）（10分）项目得分项目得分项目得分项目得分项目得分≤3.717～20≤824～30≥6021～25≤2012～15≤28～103.8～4.213～169～1023～1850～5916～2021～308～113～105～74.3～4.49～1211～1212～1740～4911～1531～405～711～203～44.5～4.65～813～146～1130～396～1041～502～421～300～2＞4.70～4＞150～5＜290～5＞510～1＞31-10～-14.2发酵原料要求杂交狼尾草青贮饲料原料应符合GB13078的规定。2

6DB50/T1251—20225检测方法5.1取样方法按照NY/T2129规定执行。5.2试样制备称取20g鲜样，加入180mL超纯水，4℃浸提24h，取50mL浸提液，8000rpm，4℃离心15min，取上清液2ml，12000rpm，4℃离心2min，取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，即为待测样品。5.3感官评定方法称取500g青贮饲料样品，均匀放置在不透明的白色瓷盘中，并保持室内空气的流通，通过嗅觉和视觉等感官器官进行辨别。5.4pH值测定按照GB/T10468规定执行。5.5水分测定按照GB/T6435规定执行。5.6有机酸含量测定液相色谱法测定青贮饲料中有机酸含量，参见附录A。5.7氨态氮/总氮含量测定苯酚-次氯酸盐显色法测定青贮饲料中氨态氮/总氮含量，参见附录B。3

7DB50/T1251—2022AA附录A（资料性）液相色谱法测定青贮饲料中有机酸含量A.1试剂和材料乳酸、乙酸、丙酸、丁酸标准品，超纯水，磷酸为分析纯。A.2仪器与设备高效液相色谱仪，电子天平，超声波振荡器。A.3试剂配制A.3.1混合标准溶液配制分别准确称取4种物质的标准品，用去离子水溶解并定容于容量瓶中，配制成混合母液，然后准确量取0.625mL、1.25mL、2.5mL、5mL标准混合母液用超纯水定容于10mL容量瓶中，即为梯度混合标准溶液，4℃冰箱中保存备用。A.3.2流动相配制准确称取磷酸3.0000g，用去超纯水溶解，调节pH值至2.7，并定容于1000mL的容量瓶中，然后用0.22μm水相滤膜过滤，超声波振荡器中脱气30min后使用。A.4测定程序A.4.1色谱条件色谱柱；流动相：0.3%磷酸；流速：1.0mL/min；柱温：50℃；进样量：5μL；检测器波长：210nm。A.4.2色谱测定取A.3.1中配制的梯度混合标准溶液进样，以峰面积（响应值，Y，AU）为纵坐标，以标准品浓度（X，mg/mL）为横坐标，绘制4种标准品的标准曲线，得到保留时间、线性范围、回归方程、相关系数、检出限信息。A.4.3空白试验将5.2制备的青贮饲料试样浸提液，采用高效液相色谱法测定乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量，总酸为乳酸、乙酸、丙酸、丁酸之和。A.4.4结果计算用色谱工作站计算试样浸提液被测物的含量，计算中扣除空白值。再通过换算浸提液制备过程中对应的样品量，获得乳酸、乙酸、丙酸、丁酸在样品中的比例。有机酸的含量按式（1）进行计算：CN180mD1111W…………………………………（1）m14

8DB50/T1251—2022式中：W---乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量，单位为mg/g；C1---样液的浓度（mg/g)，根据标曲算得；N1---稀释倍数；D1---样品的水分含量（%）；m1---制取青贮液时样品重量（g）。5

9DB50/T1251—2022附录B（资料性）氨态氮/总氮含量的测定B.1试剂B.1.1亚硝基铁氰化钠（Na2[Fe(CN)5·NO]2H2O)。B.1.2结晶苯酚（C6H5O)。B.1.3氢氧化钠（NaOH)。B.1.4磷酸氢二钠（Na2HPO6.7H2O)。B.1.5次氯酸钠（NaClO)：含活性氯5.25%。B.1.6氯化铵(NH4Cl)。B.1.7苯酚显色剂：将取0.1g亚硝基铁氰化钠、20g结晶苯酚，蒸馏水定容至2L，溶液放入棕色瓶中2℃～10℃避光保存，保质期6个月。B.1.8次氯酸钠试剂：称取10g氢氧化钠、75.7g磷酸氢二钠溶于蒸馏水中。待冷却后，加100mL次氯酸钠混匀后定容于2L，溶液使用滤纸过滤后2℃～10℃避光保存，保质期6个月。B.1.9标准铵贮备液：准确称取1.0045g氯化铵溶于适量蒸馏水中，用稀盐酸调节pH值至2.0，用蒸馏水定容至1L，得到含氨浓度为32mg/dL的标准储备液。B.2仪器与设备试验用仪器包括：分光光度计；水浴锅；移液枪：10μL，1mL，5mL。B.3测定步骤B.3.1标准曲线的建立用蒸馏水稀释氨标准储备溶液，得到氨态氮浓度分别为：32mg/dL、16mg/dL、8mg/dL、4mg/dL、2mg/dL、1mg/dL和0mg/dL的系列标准液。取系列标准工作液各40mL至贴好标签的试管中，依次加入2.5mL苯酚显色液、2mL次氯酸盐试剂。注意加入每种试剂后均要混匀。将样品放置37℃水浴中发色30min。冷却后，使用分光光度计在波长550nm测定吸光度。以吸光度和标准液浓度为坐标轴建立标准曲线。B.3.2样品的检测向每支试管中加入40μL正文中所述制备青贮浸出液，按检测步骤测定样本液的吸光度。B.3.3水分测定按GB/T6435的规定执行。B.3.4总氮的检测按GB/T6432的规定执行。B.3.5结果计算6

10DB50/T1251—2022氨态氮的含量按式（2）进行计算：CN180mD1111W……………………………（2）mM11式中：W---氨态氮含量，单位为占总氮的质量百分比（总氮%）；C1---样液的浓度（mg/dL)；N1---稀释倍数；D1---样品的水分含量（%）；M1---试样的总氮含量（鲜样%）；m1---制取青贮液时样品重量（g）。_________________________________7