DB22T 1676-2012 冻鲜鱿鱼多种致病菌的测定 多重PCR 法

《DB22T 1676-2012 冻鲜鱿鱼多种致病菌的测定 多重PCR 法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ICS67.120.30B50备案号：35809-2013DB22吉本标准仅供内部使用不得翻印林省地方标准DB22/T1676—2012冻鲜鱿鱼多种致病菌的测定多重PCR法Determinationoffood-bornebacterialpathogensfromfrozensquid——本标准仅供内部使用不得翻印MultiplePCR2012-12-17发布2013-01-01实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1676—2012本标准仅供内部使用不得翻印前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001

2、给出的规则起草。本标准由珲春出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国珲春出入境检验检疫局综合实验室、吉林农业大学。本标准主要起草人：聂丹丹、王宁宁、陶希三、杨文光、席家文、谭立新、李晶、张琦、宋立甫、赵欣玥。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T1676—2012本标准仅供内部使用不得翻印冻鲜鱿鱼多种致病菌的测定多重PCR法1范围本标准规定了冻鱿鱼中沙门氏菌Salmonella、单核细胞增生李斯特氏菌Listeriamonocytogenes、副溶血性弧菌Vibrioparahemolyticus及霍乱弧菌Vibr

3、iocholerae的多重PCR方法。本标准适用于冻鱿鱼中沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌及霍乱弧菌的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.4食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB4789.7食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验GB/T4789.20食品卫生微生物学检验水产食品检验GB4789.30食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验GB本标准仅供内部使用不得翻印/T6682分析实验室用水

4、规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求SN/T1022进出口食品中霍乱弧菌检验方法WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术的应用3缩略语下列缩略语适用于本文件。PCR：聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)DNTP：脱氧核苷酸三磷酸（DeoxyribonucleosideTriphosphate）DATP：脱氧腺苷三磷酸（DeoxyadenosineTriphosphate）DCTP：脱氧胞苷三磷酸（DeoxycytidineTriphosphate）DGTP：脱氧鸟苷三磷酸（DeoxyguanosineTriphosphat

5、e）DTTP：脱氧胸苷三磷酸（DeoxythymidineTriphosphate）SDS：十二烷基硫酸钠（SodiumDodecylSulfate）Tris：三（羟甲基）氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)Aminomethane）CTAB：十六烷基三乙基溴化铵（HexadecyltrimethylAmmoniumBromide）TE：Tris-HCl与EDTA（pH8.0）混合缓冲液Taq酶:TaqDNA聚合酶4防污染措施按照WS/T230-2002中6的规定执行。1DB22/T1676—20125试剂和材料除另本标准仅供内部使用不得翻印有规定外，所有化学试剂均采用分析

6、纯。5.1标准菌株为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌及其他致病菌的所有培养物和小心处置废物，并按GB19489中的有关规定执行。阳性菌株：沙门氏菌ATCC12011；单核细胞增生李斯特氏菌ATCC19111；副溶血弧菌ATCC17802；霍乱弧菌JL.08108。阴性菌株：（对照采用任意一种非目标菌）李斯特菌ATCC19119；普通变形杆菌ATCC33420；金黄色葡萄球菌ATCC12600；小肠耶尔森菌ATCC23715；大肠杆菌ATCC11229；克雷伯氏菌ATCC43086；粪肠球菌ATCC14500；蜡样

7、芽胞杆菌ATCC11176。5.2试剂5.2.1水：应符合GB/T6682中一级水的规格。5.2.2DNA提取液：主要成分是CTAB，Tris，EDTA。5.2.3蛋白酶K。5.2.4RNA酶。5.2.5三本标准仅供内部使用不得翻印氯甲烷（氯仿）CHCl3。5.2.6异戊醇C5H12O。5.2.7无水乙醇C2H5OH。5.2.8TE缓冲液（见附录A.1）。5.2.910×PCR缓冲液。5.2.10TaqDNA聚合酶。5.2.11DNA分子量标记