合肥市奶牛性别控制人工授精操作技术规范doc-wwwhf

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DB34/T××××—××××合肥市质量技术监督局发布2021-01-22实施2021-01-22发布奶牛性控冻精人工授精操作技术标准DB3401/T58—2021DB34/××××-××××DB3401合肥市地方标准011

1DB3401/T58–2021前言本标准由合肥市动物疫病预防控制中心提出。本标准由合肥市畜牧水产局归口。本标准起草单位：合肥市动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：张尚坤、于乐、陈俊、郑新勇。本标准于2021年1月22日发布实施。

2DB3401/T58–2021奶牛性控冻精人工授精操作技术标准1　范围本标准规定了经过X、Y精子别离后的冷冻X精液对奶牛进行人工授精的操作方法和程序。本标准适用于安徽省合肥市各地所有奶牛场〔户〕使用性别控制冷冻精液配种操作。2　标准性引用文件以下文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。但凡注日期的引用文件，其随后所有的修改单〔不包括勘误的内容〕或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。但凡不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4143-2021牛冷冻精液DB34/T089-1993牛人工授精操作规程3　术语和定义：3.1　性控精液：性控精液是指对雄性动物〔本标准指公牛〕所产生的精液，通过人为方法将X、Y精子进行科学别离，从而有目的地控制后代出生性别的精液。3.2　人工授精：人工授精技术指以非直接性交方式将精子置于雌性动物生殖道内〔子宫腔内)，使精卵结合到达妊娠生育后代的一种生殖技术。3.3　情期受胎率母牛的一个发情期中输精后，受胎母牛占输精母牛的百分比。3.4　繁殖率年度内出生的犊牛数占年度能繁殖母牛数的百分比。3.5　母犊率年度内实际出生的母犊牛数占年度内总出生犊牛数的百分比。4　授精前的准备人工授精室〔或精液处理室〕应配备显微镜、恒温水浴锅、液氮储存罐、液氮运输罐、输精器械、长把镊子、温度计和消毒药品。人工授精室应干净卫生、无尘、无烟、无气味；枯燥、通风、温度适宜；无蚊蝇，没有阳光直射，并保持摆放整洁。办公间与操作室分开，配备必要的办公用品和防护用品，各种记录表格齐全。授精器械使用前应清洗、消毒；也可使用70%左右的酒精药棉擦拭消毒，输精枪外套塑料薄膜应现用现坼，防止长期暴露在空气中。人工授精员：应具备畜牧兽医专业中专以上学历或同等培训学历，具备一定的动物繁殖、生理、病理、药理和生殖激素根本知识，技术水平较高、责任心较强。性控冻精人工授精员要求有较高的发情观察能力、直肠检查卵泡发育、准确把握输精位置、细心操作等综合能力，还要准确判断子宫炎症并及时治疗，会合理使用生殖激素。3

3DB3401/T58–20211　性控冷冻精液的解冻与携带细管冷冻精液的解冻方法：从液氮罐中取冻精时，提桶中的冻精不可超过液氮罐口，如果10秒钟内还没有将冻精取出，应将冻精立刻沉入液氮中，然后再提到罐口重复操作；单支冻精取出后在空气中先停留5秒左右，让液氮充分挥发，然后放入38-40℃温水中摇晃10秒钟等精液完全溶解后取出，用干脱脂棉或卫生纸擦干后剪齐封口，装入输精器内准备输精。解冻后精液必须现解冻现用。解冻后精液确需携带运输的，应保持在5~25℃温度之间，用清洁卫生纸包裹，避光随身携带，应在1小时内完成输精操作。2　解冻后的精液品质检查性控精子品质指标：活力、密度、畸形率、顶体完整率、细菌数等，其中活力与密度是主要指标，参见GB4143-2021。性控冻精质量国内还没有统一标准。一般要求装管精子数不少于250万/支〔剂型〕；活力＞0.4；性控比率〔X精子〕不低于90%。精子活力显微镜检查方法：抽取解冻后的精液均匀撒布在载玻片上，用盖玻片盖上，在37℃的温度环境下镜检，显微镜以放大160-400倍为宜。每个滴片要观察2-3个视野，并注意观察不同层次的精子运动，确定呈直线前进运动精子所占的百分比例即为精子的活力，同时查看精液的稠密程度。精子活力计算方法：在血球计数板上数出死精子个数，然后用高温杀死全部精子，再数出总精子数。精子活力〔%〕=[〔总精子数-死精子数〕/总精子数]×100%性控冻精活力低于0.35、密度低于每剂250万个有效精子数，不得用于输精。3　输精时机正确把握应根据母牛发情出现的以下几方面根本情况综合判定最正确输精时间。母牛精神上由兴奋、不停走动，追逐其他母牛，并爬跨它牛，到“静立〞接受它牛爬跨不动，待8-10小时后输精较好。发情时外阴有透明线状粘液流出，或粘于外阴周围，流出透明粘液由稀薄变粘稠，具有强拉丝性时输精最宜。从外阴潮湿、肿胀，阴道粘膜红润、有血丝状，到阴户开始皱缩、充血减退时。直检两侧卵巢上的变化，当一侧卵泡由小变大，由硬渐软，充满卵泡液，突出于卵巢外表有一触即破的感觉，即为最正确输精时机。4　直肠把握输精方法接受输精的母牛必须站立保定，排清宿便，防止冷空气进入直肠而引起直肠膨胀。肛门及阴户周边用消毒药水严格消毒，输精前及输精中应保持牛阴户周围的清洁及输精器具的枯燥与卫生。输精枪插入阴户时应使用薄膜防护外套。输精人员应经常剪磨指甲，手进直肠内应做到轻缓，防止抓破直肠粘膜；手指触摸卵巢也应轻缓，防止捏破卵泡。细管冻精剪切开口应整齐，装枪位置要正确，解冻后应尽快输精，冬天防止精液二次冻结。输精器插入动作应轻缓，应以35—45角度向上进入分开的阴门前庭段后，略向前下方进入阴道宫颈段。在输精器接近子宫颈外口时，扯破薄膜防护套，把握子宫颈的手拉向阴道方，使宫口接近输精器前端，要凭手指的感觉将子宫颈缓慢套入输精器。3

4DB3401/T58–2021精液的注入部位是子宫体与子宫角的结合部。在技术熟练的条件下，可将精液注入有卵泡发育排卵侧的子宫角大弯部。防止插破子宫粘膜，出血而影响受胎，在确定注入部位无误后注入精液。1　妊娠诊断方法妊娠诊断有直肠检查、激素测试、超声波诊断、血、奶中孕酮水平测定法等多种方法。激素对抗法：配种后18天左右，用治疗量的外源雌激素肌肉注射，观察母牛几天内是否有发情反响。超声波诊断法：是利用超声波的物理特性和不同组织结构的附特性相结合的物理学诊断方法。用B超仪探头扫描可以直接观察妊娠开始子宫内的最初变化。奶中孕酮水平测定法：根据妊娠后血中及奶中孕酮含量明显增高的现象,用放射免疫和酶免疫法测定孕酮的含量，判断母牛是否妊娠。直肠检查法：是最常用的方法，授精后第21—24天，无发情表现，触摸到排卵侧卵巢有1.5—cm发育完整的黄体，怀孕可能性95%。在授精后60天、第180—210天进行两次验胎，第一次是为确诊有胎，第二次是确保有胎，准备干奶。2　其他因性控冻精价格昂贵，建议每头奶牛一个情期输精一次，且建议主配青年母牛。如一头母牛连续两个情期使用性控冻精配种不孕的，要改用常规冻精，并及时分析原因和治疗。配种时如发现子宫轻度炎症，少量炎性分泌物，应于配种后8-10小时向子宫内注入适当的抗菌消炎药，以及时治疗子宫炎症。准确判断卵泡发育情况，如排卵较迟，可在配种后适当使用促排卵激素，如LHA-3、HCG、LH等，以促进卵泡的进一步成熟和排卵，缩短输精后精卵结合时间。授精后应按附录及时登记配种记录，预测下次发情时间，做好妊娠检查与记录，填写分娩记录等。________________________3