血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定

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1、血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定1.实验原理双缩脲比色终点法。在碱性条件下，蛋白与铜离子生成紫蓝色复合物。显色强度和蛋白浓度成正比。OH—蛋白质+Cu2+-------------﹥紫红色复合物2.标本采集2.1病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。2.2类型：血清或血浆。3.标本存放20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。4.标本运输室温条件下运输5.标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。6.实验材料:6.1奥林巴斯总蛋白测定试剂盒试剂1＋试剂26.1.1试剂准备：试剂为即用

2、式。6.1.2试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为24个月。试剂不可冰冻。开盖后应避免污染。6.1.3变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。6.1.4注意事项：试剂中含有氢氧化钠，不可入口！如与皮肤及粘膜接触，请立即用大量水冲洗。使用试剂时应采取必要的防护。6.2校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7.仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8.操作步骤8

3、.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9.检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：以TruCalU复合校准品总蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以g/L报告。12.参考值范

4、围[g/L]成人：66～88儿童/青少年：男女1～30天42～6241～631～6个月44～6647～676个月～1岁56～7955～701～18岁57～8057～80（注：各实验室应有自己的参考范围。）参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义：总蛋白检测对于多种疾病的诊断都有价值。肝脏蛋白合成缺陷、肾功能损伤引起蛋白丢失、肠道吸收不良或营养不良时总蛋白浓度下降。而在慢性炎症疾病、肝硬化和脱水时总蛋白浓度升高。14.操作性能14.1线性范围：0.5～150g/L14

5、.2精密度：重复性的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内重复性小于3%，总不精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密度n=20(g/L)s(g/L)CV(%)天间精密度n=20(g/L)s(g/L)CV(%)样品152.70.50.91样品152.40.61.06样品270.50.71.01样品270.71.11.53样品31040.80.80样品31041.41.3214.3方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对68个样品进行TP检测，将检测结果作方法学比

6、较，其统计结果如下：y=1.00x-0.7g/L；r=0.997。14.4灵敏度：本试剂的检测限为0.5g/L。14.5病人结果可报告范围0～150g/L，如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。15.超出范围结果处理：本法线性上限为150g/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。16.病危报警值的处理无。17.方法局限性17.1本法线性上限为150g/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果

7、乘以2。17.2干扰物质：静脉滴注大量右旋糖酐的病人血清或血浆，使用双缩脲方法的检测结果会明显增高，请选用其它方法（如凯氏定氮法）；当样品中抗坏血酸浓度£1704mmol/L，胆红素浓度£684mmol/L，血红蛋白浓度£5.00g/L，甘油三酯浓度£11.3mmol/L时没有观察到干扰18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献1.ThomasL,editor.Clinicallaboratorydiagnostics.1sted.Frankfurt:TH-BooksVerlagsgesellschaft

8、;1998.p.644-7.2.JohnsonAm,RohlfsEM,SilvermanLM.Proteins.In:BurtisCA,AshwoodER.editors.Tietztextbookofcl