血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定

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血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定1.实验原理：国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。L-天门冬氨酸+a-酮戊二酸AST草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADH+H+MDH苹果酸脱氢酶L-苹果酸+NAD++H2O2.标本：2.1病人准备：12小时禁食。2.2类型：血清，肝素或EDTA血浆。3.标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<10%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定3个月。4.标本运输：常温条件下保存运输。5.标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。6.实验材料6.1试剂：奥林巴斯AST测定试剂盒试剂1：；试剂2：6.1.1试剂准备：试剂为即用式。

16.1.2试剂稳定性与贮存试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.3变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。6.1.4注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。6.3质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7.仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8.操作步骤8.1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件

28.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9.检验结果的判断与分析10.质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11.计算方法：以TruCalU复合校准品AST校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行AST活力检测，可以直接使用ΔA/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算ALT活力的计算因子见下表：ΔA/min×因子=AST活力[U/L]底物起始的反应（37℃）样品起始的反应（37℃）340nm21431745334nm21841780

3365nm3971323512.参考值范围[4]不含磷酸吡哆醛含磷酸吡哆醛女性<31U/L10～35U/L男性<37U/L10～50U/L参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13.临床意义[1,2]丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙转氨酶（GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转氨酶（GOT）。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给a-酮酸的反应。

4ALT是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。因此同时进行ALT和AST的检测用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT比率可用于肝病的鉴别诊断。比率<1预示中度的肝损伤；比率>1和严重肝病有关，常见慢性肝病。14.操作性能14.1线性范围2-800U/L。14.2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。不含磷酸吡哆醛批内精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)天间精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)样品125.10.823.25样品125.71.134.40样品251.31.573.06样品248.60.671.38样品31160.900.77样品31150.800.69含磷酸吡哆醛批内精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)天间精密度n=20(U/L)s(U/L)CV(%)

5样品143.61.102.51样品144.01.593.61样品274.51.792.41样品277.03.053.97样品31743.181.83样品31873.371.8014.3方法学比较：不含磷酸吡哆醛本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对78个样品进行AST活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.98x-0.51U/L；r=0.999。含磷酸吡哆醛本公司含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对80个样品进行AST活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=0.97x-0.79U/L；r=0.995。14.4灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。14.5病人结果可报告范围2-800U/L。15.超出范围结果处理：本法对AST活力检测的最大ΔA/min在340、334nm为0.16，在365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+

69稀释，重新测定，结果乘以10。16.病危报警值的处理无。17.方法局限性17.1本法对AST活力检测的最大ΔA/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果乘以10。17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度£1704mmol/L，胆红素浓度£684mmol/L，甘油三酯浓度£22.6mmol/L时没有观察到干扰。红细胞内富含AST，因此溶血血清检测结果明显偏高。18.补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19.参考文献：1.ThomasL.Alanineaminotransferase(ALT),Aspartateaminotransferase(AST).In：ThomasL,editor.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt：TH-BooksVerlagsgesellschaft;

71998.p.55-65.1.MossDW,HendersonAR.Clinicalenzymology.In：BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia：W.B.SaundersCompany;1999.P.617-721.2.BergmeyerHU,HorderM,RejR.InternationalFederationofClinicalChemistry(IFCC)ScientificCommittee,Analyticalsection：approvedrecommendation(1985)onIFCCmethodsforthemeasurementofcatalyticconcentrationofenzymes.Part3.IFCCmethodforalanineaminotransferase(L-alanine：2-oxoglutarateaminotransferase,EC2.6.1.2).JClinChemClinBiochem1986;24：481-95.4.LorentzK,RohleG,SiekmannL.EinfuhrungderneuenStandardmethoden1994zurBestimmungderkatalytischenEnzymkonzentrationenbei37℃.DGKlinischeChemieMitteilungen1995;26：190-2

820.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。