反胶团萃取牛血清白蛋白论文

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1、优秀毕业设计1引言1.1牛血清白蛋白的简介蛋白质是一类重要的生物大分子，它在生物体内占有特别重要的地位，蛋白质和核酸是构成细胞内原生质的主要成分，而原生质是生命现象的基础。蛋白质的结构决定了蛋白质的性质和功能，相对于其他蛋白质而言，血清白蛋白的结构并不复杂，血清白蛋白(SerumAlbumin)是人和哺乳动物体内血浆中含量最丰富的蛋白质，约占血浆总蛋白的60%。它是血液缓冲剂，能维持正常的血液渗透压:并且它还可以存储和转运众多的内源性和外源性物质。血清白蛋白是一种重要的蛋白质，在血液中的平均浓度为42g/L(0.63mml/L)有着极其重要的生理功能。另一方面，相对而言，血清白蛋白比较容易分离

2、提纯，可以大量制备。所以，血清白蛋白成为研究蛋白质的理化性质、生物学功能、体内代谢、临床应用和遗传变异等方面的理想蛋白质，从五十年代开始人们对其展开了大量的研究，以期在分子水平上揭示相关生命过程的奥秘。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。5.起酸

3、碱度缓冲液作用。6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。在动物血液中,白蛋白分子和其他血液成分共同协调保护红细胞,处于等渗状态,此外,白蛋白分子能运输代谢产物,保持动物生理状态。牛血清白蛋白产品(BSA)是一种用途广泛的生物产品，能配制细胞培养基；配制标准蛋白质试剂盒；借用电泳技术测定未知蛋白质的分子量。BSA产品是血清的稀释剂,是其它蛋白质的稳定剂。配在酶试剂中,BSA可以保护酶的活性,而不让酶短期失活。用在免疫生化的Elisa和免疫杂交工作中,BSA能做非专一性吸附杂质的抑制剂,BSA产品能联结抗体抗原、受体蛋白,做亲和吸附剂中的手臂(arm)[1]。牛血

4、清白蛋白(BovineSerumAlbumin，简写为BSA)是由582个氨基酸残基组成，分子量约为67000，等电点为4.8.优秀毕业设计BSA支链中含有17个对维系蛋白质空间结构稳定性起重要作用的二硫键，由它们组成八对结构交叉相邻的二硫桥键按物理特性溶解度来分，牛血清白蛋白属于清蛋白，溶于水、稀盐、稀酸及稀碱溶液，能为饱和硫酸按所沉淀。按其生物功能分，其属于转运蛋白;按其形状和大小分，其属于球状蛋白，形状接近于球型或椭球形，疏水的氨基侧链位于分子内，亲水的侧链在外面暴露于水溶剂，因此在水中的溶解性非常好。因为蛋白质是两性高分子电解质，主要由疏水性各不相同的20种氨基酸组成。在水溶液中，多肽

5、链中的疏水性氨基酸残基具有向内部折叠的趋势，使亲水性氨基酸残基分布在蛋白质立体结构的外表面。即使如此，一般仍有部分疏水性氨基酸残基暴露在外表面，形成疏水区。疏水性氨基酸含量高的蛋白质的疏水区大，疏水性强。因此，蛋白质表面由不均匀分布的荷电基团形成的荷电区、亲水区和疏水区构成[2]。1.2几种分离方法的比较利用基因工程菌发酵生产蛋白质，料液中含有大量组成复杂的培养基、菌体代谢产物等，目标蛋白的含量常常不到蛋白质总量的1%。新近发展的亲和色谱具有很高的选择性，但吸附过程的少量杂质非特异性结合使纯化效果大大降低，且能和酶专一结合的配基选择困难。毛细管凝胶电泳也只能分离微量的蛋白质纯品，需要高压电场，

6、无法放大。大多数蛋白质是生物活性物质，溶液的pH值、离子强度的变化都可能使其变性失活，特别是被用作医药、结构研究的蛋白质，不仅要有一定的纯度，产品的活性保持也很重要。反胶团法分离蛋白质，使蛋白质始终处于有水的环境中，不致失活，有机相可循环使用，设备简单、料液预处理简单，不存在膜污染，对于蛋白质分离方法的改进具有重要意义。生物产品的生产费用50－90％耗费在分离纯化过程中，因此，对这一过程的研究和改进具有重要意义。目前，所采用的生化产品分离方法主要有盐析、沉淀、层析、电泳、高效液相色谱等，它们的共同缺点是连续操作和放大困难。沉淀(precipitation)是物理环境的变化引起溶质的溶解度降低生

7、成固体凝聚物(aggregates)的现象，利用沉淀原理分离蛋白质等生物产物的回收、浓缩和纯化。水溶液中蛋白质的溶解度一般在生理离子强度范围内(0.15-0.2mol/kg)最大，而低于或高于此范围时溶解度均降低，蛋白质在高离子强度的溶液中溶解度降低、发生沉淀的现象称为盐析(Salting-out)，利用盐析沉淀初级纯化的产物中盐含量较高，一般在盐析沉淀后，需进行脱盐处理。优秀毕业设计层析是根据混