DB61∕T 408-2007 牛奶中D-乳酸∕L乳酸的测定—酶法(陕西省)

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1、DB61陕西省地万标:住DB61/T408-~2007牛奶中D一乳酸/L乳酸的测定酶法,2007斗争03发布2007…09-03实施陕西省质量技术监督局发布DB61/T408一…2007吕IJ本标准中的陪录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国陕西出入境检验检夜局提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和昌陕闹出入境检验检位局。本标准起草人:蒋宏伟、欧黯宏、张春山、睬茂盛。本标准系首次发布。DB61rr408…2007牛奶中D一乳酸/L乳酸的测定一酶法?在自本标准规定了酶法训定牛奶中0--乳酸/L乳酸的含量的方法。本标准适用于牛奶中0-乳酸/L乳酸的测定。2规?在性引用文件~-纠文1'

2、1:中的条款通过本标准的号剧而成为本标准的条款。凡是注日期的引}刊文件，其随后所有的修改单(不包招勘误的内容〉或修订版均不适用了本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文仲的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适剧于本标准。EN-ISO8069无水牛奶中乳酸及乳黯盐含量的测定EN12631水果手11蔬菜汁中?乳酸和IL乳酸(盐〉含量的测定DIN10335牛奶和牛奶制品中O--jL-乳酸的测定3符号和缩略语:fliD-LDH0-乳酸脱氢酶LιLDH七乳酸脱氢酶tjNAD;自主i碱踉n!岭二核廿酸ti-NADH日.烟碱.腺:漂岭核廿酸氨-GPT谷氨般丙酣酸转服

3、酶U酶活度国际单位，在25QC的标准条件F每分钟1U的酶活动量转化成1口mol的物质。A吸光度值C物质的浓度4原理i在D一乳酸脱氢酶CD--LDH)存在的条件卜。，0-乳酸被烟曹先肢腺嗦怜;二核廿酸(NAD)氧化成丙酣酸盐(pyruvate)，L一乳酸需要在L←乳酸脱氮酶(L-LDH)存在时才能被氧化。反院式为:(1)0『町…一-+>Lactate+NADpyruvate+NADH+Hl.-I.I)II1(2)L-Lactate+NAD一一一一-+pyruvaet+NADH+H=iz--反院的平衡取决了乳酸的棋。通过收集以?琪的中，在L一谷氨酸CL--glutamatc)存在的条件l

4、卡，4.、被谷氨酸丙翻酸转肢黯CGpT)催化的同酣酸盐(pyruvae)，反问平衡有利于丙酣酸监(pyruvac)平11NADII的生i泣，反应式沟:DB611T408…2007GPT(3)Pyruvate十L--glutarnat告一……·L-alanine+2~oxoglutarate以上反应中影成的NADHD-Lactate、L-Lactate的量分别在在化学计量关系α生成的NADH的吸光度但可在340nm下棋髦。51式齐。5.1在甘氮肤5.2技AD5.3GPT5.4D~LDH5.5L~LD日5.6HCl5.7去aO日5.8民OH5.9监蒸/立在10也可使南试剂盒6ì'支菇6.

5、1移液栓(5mL、1mL、50~200l.lL1O~50JlL)6.2比色显:光投1.Ocm6.3紫外分充光道计，可变波[(，{t:HOnm削吨。6.4茹叠波:纸，孔径10μm06.5电子夭6.6'担;盐水浴器6.7~的旋震荡器6.8离心机6.9离心智、烧杯、三角瓶、移液检配套滴头、漏斗、玻璃桦好7检翠IJ步理7.1试韵j!jl割7.1.1现甘委主鼓楼;中j在称取4.75时又甘氨放和10.88克的L一谷氨酸盐，加入栩栩L豆茶本，充分洛解后，周2mol/LNaOHì.鸣声至10.0;7.12NAD工f乍液使用时lmL重茶水需解35附干粉即)，JNADTff液。7.1.3GPT悬浮菠使J

6、Ij时，fUO.7此豆豆在7j(~轩解1100巳的GPT干粉去。为G归结浮破α7.1.4D-LDH;窑活使JtJ时，刑O.7mL重茶水洛解大的3800[J的D-LDH。7.1.5L-LDH;.密液使用时，mO.7mL重蒸水浴解大约3800U的D-LDHo7.1.6日C):2mol/L7.1.7NaOH:2mol/L2DB61n'柏8-20077.1.8KOH:2mollL1.2试样制备取2mL(g)牛奶，加入98民意蒸水，闹市J旋震葫器展荡10min，充分搅匀，过祷，滤被用于检醋。1.3拴溃.IJ(按表l进行)91.3.1设空白对路:取比色皿，干在沙;加入1.OOOmLX'J，.甘氨

7、敖缓冲液马O.200mLNAD工作液，O.020mLGPT悬浮液、1.000mL蓝蒸水，混合置5min启读取眼光度值(A，)，加入0.02mLD-LDH榕攘，待槌合反应究成imJiJd'(大约30mÌn)，读取暖光度伯CAz)，离加入0.02mLL…LDH溶壤，件;提合反问，完成(大约30min)，卖取极光度值(A3)，空白眼光造假差(AcAl)帕:7.3.2样品:伊取比色血，使次如入1.OOOmLXX甘氨肢缓冲液、O.200mLNAD.I~作攘，。‘02