乙肝定量检测的临床应用-龚丽坤

《乙肝定量检测的临床应用-龚丽坤》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、乙肝两对半定量检测的临床运用楚雄州人民医院检验科龚丽坤楚雄州人民医院内容乙肝两对半定量检测的必要性。定量检测方法学的选择。乙肝两对半定量检测的临床运用。楚雄州人民医院乙肝定量检测的必要性亚洲是乙肝病毒肆虐的重灾区，全球2/3以上的慢性乙肝患者生活在亚洲。而根据1992年全国乙肝血清流行病学调查的结果，中国的乙肝病毒携带者近1.3亿人，平均每10个人就有一个，感染率更高达57.6%。2008年4月，卫生部公布了最新的全国人群乙肝等有关疾病血清流行病学调查结果：HBsAg携带率为7.18%，携带者仍然达9300万人。可见乙肝的防治工作所面

2、临的形式依然严峻。我们应充分认识到乙肝危害的严重性和长期性。楚雄州人民医院为保障广大人民群众的身体健康，提高人口素质，有效控制病毒性肝炎（HBV、HCV）艾滋病和梅毒等传染性疾病的传播，加强肝炎、艾滋和梅毒等传染病的预防与控制工作，国家制定了《中华人民共和国传染病防治法》、《艾滋病防治条例》及最新的《中国预防与控制梅毒规划（2010-2020年）》。楚雄州人民医院按照卫生部《临床输血技术规范》相关规定,要求对输血前和手术前(包括产前)患者进行血液传播性疾病的血清指标检测，即乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒抗体(抗HCV)、人类免疫缺陷病毒(Ⅰ型,

3、Ⅱ型)抗体(抗HIVl/2)、梅毒抗体（TP）四项传染性指标。我国2012年发布的《中国丙型病毒性肝炎医院感染防控指南》中要求：进行外科手术及侵入性诊疗操作(所有涉及外科操作的内科、内镜以及妇科、产科、牙科等的常规医疗操作)患者在进行操作前筛查丙肝病毒抗体；血液透析患者首次血液透析前应进行丙肝病毒抗体检测，丙肝病毒抗体阴性者在血透中建议定期(半年)进行丙型病毒性肝炎的筛查。这对于避免医源性感染、预防医务人员的职业感染，防止出现医疗纠纷有积极意义。楚雄州人民医院目前状况目前国内检测HBV感染血清学标志物运用较多仍然是酶联免疫吸附实验（ELIS

4、A）。缺点:无法定量、灵敏度低、无法完成HBV感染的动态观察及低水平HBV感染指标检测。胶体金检测技术：检测时间较短。不需要特殊设备，操作简单。灵敏度低、特异性差、假阳性假阴性的问题难以克服。楚雄州人民医院方法学的变迁60年代末70年代初的琼脂扩散法，依次发展为血凝法、酶联免疫吸附(ELISA)、同位素免疫标记（RIA）、化学发光免疫分析、生物发光、电化学发光免疫标记和80年代中建立的稀土离子荧光免疫标记技术。方法学每发展一步，乙肝标志物检出的灵敏度和准确性都得到不同程度的提高。乙肝标志物的定量检测成为主流。楚雄州人民医院定量检测的方法学

5、化学发光技术电化学发光技术时间分辨荧光免疫分析技术高敏化学发光酶免疫测定技术楚雄州人民医院方法学的选择时间分辨荧光免疫分析仪(Easy-Cuta)楚雄州人民医院时间分辨荧光免疫分析技术反应原理：用具有双功能基团结构的螯合剂，使其一端与铀（Eu）连接，另一端与抗体/抗原分子上的自由氨基连接，形成铀标记的抗体/抗原，经过免疫反应之后生成免疫复合物。由于这种复合物在水中的荧光强度非常弱，因此加入一种增强剂，使Eu3+从复合物解离下来，自由Eu3+同增强剂中的另一种螯合剂螯合形成一种胶态分子团，这种分子团在紫外光的激发下能发出很强的荧光，信

6、号增强了百万倍。根据荧光值的多少来计算待测物的浓度。楚雄州人民医院HighSensitivityCLEIA高敏化学发光酶免疫测定法希森美康高敏发光HISCL-5000楚雄州人民医院HISCL-50002步法反应原理(ex.HBsAg)R1:BiotinylatedAnti-HBR3:ALP-labelesAnti-HBsMab生物素化抗体碱性磷酸酶标记的单克隆抗体R2:Streptavidin-coatedR4:缓冲液MP链霉素包被的磁性微粒R5:底物CDP-Star®检测光信号待测物HBsAgB/F分离B/F分离17min0min5m

7、in10min楚雄州人民医院12方法学的选择雅培微粒子化学发光ARCHITECTi2000楚雄州人民医院检测原理：利用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的测定方法。以吖啶脂为发光的标记物，固相载体为极细小的磁性颗粒。磁性颗粒是以三氧化二铁为核心，外包一薄层聚苯乙烯，直径10-20um，由于磁性微粒体积小，几千万颗微粒的表面积比等量的固相载体表面积大的多，可吸附更多的抗体，同时磁性离子的核心是铁，在磁场中很快下沉，因此容易进行洗涤和分离。其测定原理与ELASI中的双抗体夹心法和竞争结合法相似。最后加入H2O2和PH纠正液使成碱性，这时吖

8、啶脂在不需要催化剂的情况下分解、发光，由激光器和光电倍增管接收。记录5s内所产生的关子能，这部分光的积分与被测抗原的量成正比，可从标准曲线上计算出待测