NY∕T 2959-2016 兔波氏杆菌病诊断技术(农业)

《NY∕T 2959-2016 兔波氏杆菌病诊断技术(农业)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ICS11.220B41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T2959一2016兔波氏杆菌病诊断技术Diagnostictechniqueforbordetellacaniculum2016-10-26发布2017-04一01实施中华人民共和国农业部发布NY/T2959-2016目IJ~本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。本标准起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、西北农林科技大学。本标准主要起草人:王娟、赵思俊、郑增忍、由志娜、张彦明、王

2、玉东、张耀相。INY/T2959-2016兔波氏杆菌病诊断技术1范围本标准规定了兔波氏杆菌病的微生物学诊断、玻片凝集试验等技术要求。本标准适用于兔波氏杆菌病的诊2试剂与器材2.1试剂2.1.1嗣特灵改良2.1.22.1.32.1.42.1.52.1.62.1.72.1.82.1.1012.1.122.1.132.1.142.2器材2.2.12.2.22.2.3显微镜:10X~2.2.4生物安全柜。2.2.5接种针或接种环。2.2.6恒温培养箱:[(lO~50)士1TC。2.2.700恒温水浴锅:20C~100C。2.2.8基因扩增仪。2.2.9电泳仪

3、。2.2.10凝胶成像系统。2.2.11高速冷冻离心机:12000r/min。2.2.120冰箱:4C。2.2.13微量加样器:200μL、1000μL。1NY/T2959-20163流行病学兔波氏杆菌病是由支气管波氏杆菌引起的一种慢性呼吸道传染病。该病传播广泛，在兔群中的感染率非常高，常呈地方性流行，多为慢性，急性败血性死亡较少。多发于气候易变化的春秋两季，主要经呼吸道传播，带菌兔和病兔鼻腔分泌物中的病菌随咳嗽、喷嗖飞沫污染饲料、饮水、笼舍和空气传染健康兔。4临床症状4.1鼻炎型病兔精神不佳，闭眼，鼻腔流出浆液性或粘液服性分泌物。病兔打喷嗖，呼吸困

4、难，经常用前爪抓擦鼻部，鼻孔周围及鼻腔黠膜充血，流出多量浆液性或知液性分泌物。4.2支气管肺炎型鼻腔茹膜红肿、充血，有多量白色蒙古液服性分泌物，打喷嚷，呼吸困难，鼻孔形成堵塞性册皮。5病理学变化鼻腔、气管蒙古膜充血、水肿，鼻腔内有浆液性、黠液性或结液服性分泌物。严重病例可见鼻甲骨萎缩。肺部多见于心叶和尖叶有大小不-的病灶，重症病例侵及全肺叶，病变部稍隆起、坚实、呈暗红色、褐色;有些病例肺有腋包，肝脏表面也有散在服包，服包内积有秸稠奶油样乳白色服汁。6微生物学诊断方法6.1采样6.1.1发病兔样品采集及处理用75%酒精棉签，对兔双侧鼻孔前及正前庭0.5

5、cm处进行消毒。然后，用肉汤湿润的无菌小棉签，分别在鼻孔内lcm处旋转采取鼻站液，无菌操作放人荆特灵改良肉汤增菌液中。6.1.2死亡兔样品采集及处理无菌操作采取病变的肝脏、脾脏、肺脏少许放入无菌塑封袋中，吸取2mL~3mL胸腔渗出液。样品20C~80C保存，2h内送实验室进行细菌分离培养。6.2细菌形态观察将病料制作抹片2张~3张，分别用革兰氏染色和美蓝染色，油镜下观察。兔波氏杆菌病料抹片镜下观察细菌形态:革兰氏染色j))j'性，小球杆菌散在分布于病变组织中;细菌的外围有不易着色透亮的蒙古液圈，在中性粒细胞外围最容易找到兔波氏杆菌。美蓝染色，蓝紫色小

6、球杆菌，无两极着色现象。6.3分离培养6.3.1接种对鼻黠液采集的棉拭子直接划线接种改良麦康凯(荆特灵)琼脂培养皿4个(其中，间断划线法接种2个平皿，连续划线法接种2个平皿);肝脏、脾脏、肺脏及胸腔渗出液，每种脏器接种2个绵羊鲜血鲍一姜氏平板，用接种环在平板上先涂抹0.5cmX(2~3)cm大小，然后用接种环分别采取间断和连续划线接种全部平板，37"C24h~48h培养。6.3.2可疑菌落初选在改良麦康凯(病特灵)琼脂平板上为中等大小、圆形、表面光滑、边缘整齐、湿润、透明呈茶色菌落;或者在绵羊鲜血鲍一姜氏平板上为灰白色、圆形、凸起、表面光滑、边缘整齐

7、、有明显的自溶血环的中等大小菌落，为兔波氏杆菌可疑菌落。6.4染色镜检NY/T2959-2016革兰氏阴性，多单在或成双，呈微小杆菌或微小球杆菌。I相菌呈整齐的类球菌、球杆菌，染色均匀，大小为O.2μmXO.3μm，无芽于包，散在排列;山相菌中等大小杆菌，个别呈丝状、散在排列，大小为O.4μmXO.5μm，无微英膜，无芽抱，着色均匀。6.5生化鉴定6.5.1生化实验挑取符合6.3.2特征的2个以上可疑菌落，按照商业化的生化反应管说明书进行生化试验。6.5.2生化特性兔波氏杆菌在三糖铁琼脂斜面产碱，红色加深，底层无变化。其他生化反应结果见表1。表1波氏

8、杆菌生化反应结果生化试验项目反应结果生化试验项目反应结果葡萄糖甲基红乳糖w试验麦芽糖能基质l.f.糖硫化氢甘