Neon细胞电转仪中文说明书(MPK5000)

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1、v1.0可编辑可修改一，简单的3步骤程序。1.将收集到的细胞和待转染的分子（例如DNARNAsiRNA）的混合物加入到提取物中o2.将带专用枪头的移液器插入带有电极杯的移液器座中;在设备上选择程序，然后按开始。3,拔下移液器，将转染的细胞转移到含有适当培养基的培养容器中。注：1,为了避免污染，强烈建议只使用电极杯10次。建议在切换到不同质粒DNA/siRNA或细胞类型时更换电极杯和缓冲液2.为了确保重复性和排除转染条件的变化，建议不要使用枪头超过2次二，软件操作程序1.按下电源开关（位于设备背面，第vii页）打开Neon?设备。本机检查确保Neon?移液器站已连接到设备，然后显示启动屏幕。2.

2、按Voltage启动数字键盘输入电压值。按所需的电压值，然后按Done保存该值。注意：如果任何输入值超出限制，则会显示错误信息，弁自动设置最小的限制值。3.按Width激活数字键盘输入宽度值。按所需的宽度值，然后按Done保存该值。4.按Pulses激活数字键盘以输入脉冲值。按所需的脉冲值，然后按Done保存该值。5.如果要保存这些电穿孔参数，请按主屏幕上的“Save”将程14v1.0可编辑可修改序保存在数据库中。1.按所需的程序号码编辑程序。选定的程序会突出显示。2.显示“Edit”屏幕后，按键盘按钮输入用户名。光标自动移动到下一个字段协议，弁突出显示为红色。继续输入Voltage,Widt

3、h和Pulses信息。8。按Enter键将信息保存在数据库中。9.继续准备细胞和DNA弁设置用于电穿孔的移液器座三，细胞与DNA昆合物准备注意事项：1.将纯化的DNA重悬于1-5^g/^L浓度的去离子水或TE缓冲液(10mMTrisHCl,1mMEDTA)中。浓度可能因细胞类型而异。2.DNAt不应超过使用总体积的10%。3.通过测量A260/280比例来检查纯化的DN硼剂的纯度。电穿孔的比例应至少为。4.该装置已经用4-7kb质粒进行常规测试，质粒高达约20kb不应该是问题。使用大于20kb的质粒很可能降低转染效率。5.不要用乙醇沉淀DNA以浓缩DNA通过乙醇沉淀的浓缩DNA显示差的转染效率

4、和由于盐污染导致的细胞活力。14v1.0可编辑可修改1.不含Ca2+和Mg2+的D-PBS或磷酸盐缓冲盐水（PBS（第40页）流程:1.用3mL电解缓冲液（使用缓冲液E,10HLNeon?Tip和BufferE2,100LNeon?Tip）填充电转杯。（确保管子侧的电极完全浸入缓冲液中。）2.将电极杯插入移液器座，直到听到咔嗒声14v1.0可编辑可修改14v1.0可编辑可修改确保Neon?管的侧面电极与Neon?移液器站的侧球柱塞良好连接（见下图左侧正确位置）14v1.0可编辑可修改3.在电穿孔前一天，将细胞转移到具有新鲜生长培养基的培养瓶中，使得细胞在实验当天为70-90%汇合。4.对于大多

5、数优化协议，每10^LNeon?Tip可提供5X104-2x105个细胞。（5X105-2x106个细胞每100LNeon?Tip适用于大多数优化的方案。）5.将含有血清，PBS（不含Ca2+和Mg2+）和胰蛋白酶/EDTA溶液的培养基的等分试样预温至37Co从培养瓶中吸出培养基，弁使用PBS不含Ca2+和Mg2+）冲洗细胞。使用胰蛋白酶/EDTA或TrypLEExpress（目录号12563）对细胞进行胰蛋白酶消化。取一等份的胰蛋白酶化细胞悬浮液弁计数细胞以确定细胞密度。将细胞转移到微量离心管或15mL锥形管中，弁在室温下以100-400Xg离心细胞5分钟。通过在室温下以100-400Xg离

6、心5分钟，用PBS（不含Ca2+和Mg2+）清洗细胞。吸出PBS弁以x107个细胞/mL的最终密度将细胞沉淀重悬于ResuspensionBufferR中。轻轻移液细胞以获得单细胞悬浮液。避免在室温下储存细胞悬浮液超过15-30分钟，从而降低细胞存活力和转染效率。可以调整重悬细胞密度以适应电穿孔方案（第18页）或优化方案（第24-29页）的推荐细胞数。6.通过用含有血清和补充剂的培养基将孔插入24孔板，不用抗生素，弁在潮湿的37C/5%CO2培养箱中预培养板。如果您使用其他培养板，请参见第18页电镀介质卷建议。14v1.0可编辑可修改3.对于每个电穿孔样品，下面列出了每孔的质粒DNA或siRN

7、A的推荐量，细胞数量和电镀培养基的体积。使用再悬浮缓冲液T作为初级悬浮液FormatCellTypeDNA[问sKNA(nM)NeonTipVol.platingmediumCeUno.BufferRnrBufferTAdherent0.25-0.510-300IDpLia1於10pLVwellSuspension0.5-1iDpLD1UUpL2-5x1010^iL/well48-wellAdhe