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时间:2022-01-29
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1、Millipore超滤管保养方法超滤管保养和使用方法超滤管的作用:1)浓缩:2)脱盐;3)换Buffer:4)具有部分纯化的效果。1、新的超滤管可以直接使用,不需要其他处理;2、超滤管不能高温灭菌:3、换浓缩蛋白时超滤管的处理超滤管可以重复使用,用0.1M的NaOH浸泡l—2h,用水清洗,再在离心机上用相关溶液(灭菌水或PBS)清洗3次,即可用于浓缩新的蛋白;4、平常放"Z超滤管的处理经常使用的超滤管,在用0.1M的NaOH浸泡l—2h,用水清洗,用灭菌水浸泡,务必保持滤膜润湿,不能长菌;5、长时间放❷Z超滤管的处理较长时间不使用的超滤管
2、,在用0.的NaOH浸泡l-2h,用水清洗,用20%的乙醵浸泡保存,务必保持滤膜润湿,不能长菌;6、超滤管使用的离心转速离心转速一般采用4000rpm(一般建议为3000g,最大不能超过4000g)离心5—8分钟,即可将4ml样品浓缩至1ml以下至几十微升:速度过高,目的蛋白会离下,导致目的蛋白丢失:速度过低,耗时,工效低;7、枪头伸入超滤管中时注意事项加蛋白液或Buffer到超滤管时,可以用蓝枪头;但从超滤管底吸取浓缩好的目的蛋白时,必须用黄枪头:用枪头伸入超滤管中时,必须防止碰到滤膜,以免戳破滤膜;8、减少超滤管对蛋白的吸附损失超滤管
3、的滤膜能吸附蛋白,会导致目的蛋白减少可达30%左右:为减少蛋白损失,在吸尽目的蛋白液后,再用蛋白Buffer吹洗超滤管的管底,可以将滤膜吸附的蛋白洗下大部分而减少目的蛋白的损失;如纯化的蛋白较浓时,注意浓缩的体积不可过小;一般无论如何离心,底部会保留有200U1左右的蛋白液:9、如何界定超滤管失效在正常使用下,滤膜没有被戳破时,浓缩蛋白液中不含有蛋白或量很低(包括目的蛋白),而第一次的滤下液中含有目的蛋白,则说明滤膜失效,需要换新的超滤管。不同MWCO的离心转速要求不同。当然转速越大,时间越长,透过就越多。而且速度也和料液性质有关,一般只
4、能根据你的蛋白溶液进行试验,看flux是多少,而且随着透过体积增加,flux会逐渐降低。以使其达到想要的浓缩倍数。sartorius的离心管保证有最小体积不会滤干,具体要看不同的厂家。离心条件说明书上应该有推荐值,一般至少要3000g以上,注意控制过程中的温度以保证蛋白活性。可以反复用几次,次数多了就不行了,管和膜都可能会破。不用的时候,20%EtOH保存以免长菌。我用的是millpore的超滤离心管要求的分之量10k的,体积15ml要求的转速低于4000g不过这个很容易破基本上是一次性的另外注意不要让膜干了感谢您的阅读,祝您生活愉快。
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