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学校代码10264研究生学号M140101086上海海洋大学硕士学位论文基于生物絮团养殖系统的黄颡题目：鱼养殖效果研究英文题目：StudyonPseudobagrusfulvidracoculturedinbioflocaquaculturesystem专业：水产养殖研究方向：循环水和生物絮团养殖姓名：张世阳指导教师：谭洪新（教授）二O一七年四月六日 上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日 上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注中国水产科学研究院吴凡研究员主席渔业机械仪器研究所中国水产科学研究院车轩副研究员委员渔业机械仪器研究所上海海洋大学李娟英副教授委员海洋生态与环境学院答辩地点生命学院A211答辩日期2017.05.19 上海海洋大学硕士学位论文基于生物絮团养殖系统的黄颡鱼养殖效果研究摘要传统的池塘高密度养殖模式是一种通过大量换水，大量用药来维持养殖水体的水质稳定和养殖动物的健康，从而达到高密度养殖目的的养殖模式。但是这种养殖模式也造成自然水源的污染、疾病频发和水产品安全等诸多问题。传统的池塘高密度养殖模式已经严重妨碍了我国水产养殖业的健康发展。封闭式循环水养殖系统是指通过对养殖水体的物理和化学等方法处理，来达到养殖水体的循环利用。生物絮团养殖模式是通过养殖水体中的微生物的同化作用和硝化作用来达到处理排放到养殖水体中的氮素，实现零换水的养殖模式。这两种养殖模式都是我国水产行业发展的重要方向。对于黄颡鱼在这两种养殖模式下的养殖效果研究都鲜见报道。本文实验分为以下三个部分。1.生物絮团、循环水养殖模式下黄颡鱼养殖效果的对比研究为研究黄颡鱼在生物絮团和循环水养殖模式下，其生长消化和免疫能力的变化，采用封闭式循环水养殖系统（RAS）和生物絮团养殖系统(BFT)养殖黄颡鱼（9.68±1.50）g60d。结果显示，在整个实验期间总氨氮和亚硝态氮一直处于较低浓度，从第12天开始BFT组总氨氮浓度高于RAS组。实验结束时RAS组和BFT组的终末密度分别为（4.22±0.57）和（3.45±0.65）kg/m³，RAS组的末均质量、增重率和特定生长率均显著高于BFT组。RAS和BFT组的胃脂肪酶、肠脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性磷酸酶和总超氧化物歧化酶活性和血浆甘油三酯和血糖含量在实验结束时没有显著差异（p＞0.05）。RAS组的血浆总蛋白和总胆固醇显著高于BFT组（p＜0.05）。2.不同饲料C/N对生物絮团黄颡鱼养殖效果的影响为了研究黄颡鱼生物絮团养殖所适宜的饲料C/N,实验分析了不同C/N比对水质和黄颡鱼生长、消化酶活性和非特异免疫酶活性的影响。对照组投喂基础饲料（C/N为8.0：1），实验组在基础饲料上添加葡萄糖，控制C/N分别为12：1和16：1。结果显示，整个实验期间三组的总氨氮和亚硝态氮一直处于较低浓度，实验结束时C/N8组的总氨氮浓度显著高于C/N12和16组（p＞0.05）。三组的硝态氮在整个养殖过程中都持续积累。养殖结束时，终密度、末均质量、饵料系数之间没有显著差异。实验结束时，三组的胃脂肪酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶活性没有显著差异（p＞0.05），C/N16和12组的肠脂肪酶活性没有显著差异（p＞0.05）I 上海海洋大学硕士学位论文且显著高于C/N8组，C/N16和8组的碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性都显著高于C/N12组（p＜0.05）。3.不同混合液悬浮固体对生物絮团黄颡鱼养殖效果的影响为了研究生物絮团养殖系统中，不同混合液悬浮固体（MLSS）对黄颡鱼的生长、水质、消化酶活性和非特异免疫酶活性的影响，本实验调控生物絮团养殖系统中的MLSS分别为50-100mg/L（L组）、350-400mg/L（M组）和750-800mg/L(H组)，养殖黄颡鱼30d。实验表明不同MLSS对黄颡鱼的生长没有显著影响。整个实验期间三组的总氨氮和亚硝态氮一直处于较低浓度，硝态氮持续积累。实验结束时，三组的胃脂肪酶活性为H组＞M组＞L组（p＜0.05），M组和H组的肠脂肪酶活性差异不显著（p＞0.05）且高于L组（p＜0.05），三组的胃蛋白酶活性为M组＞H组＞L组（p＜0.05），L组和H组的胰蛋白酶活性差异不显著（p＞0.05）且低于M组。关键词：生物絮团，循环水养殖，碳氮比，混合液悬浮固体，非特异性免疫II 上海海洋大学硕士学位论文StudyonPseudobagrusfulvidracoculturedinbioflocaquaculturesystemABSTRACTThetraditionalpondintensiveculturemodelisakindofaquaculturemodelwhichcanachievetheaimofhighdensitybreedingthroughthelargeamountofwaterchanging,thelargeamountofmedicinetomaintainthewaterqualityoftheculturedwaterbodyandthehealthoftheculturedanimals.Butthisfarmingmodelalsocausedthenaturalwaterpollution,frequentdiseaseandaquaticproductsafetyandmanyotherissues.ThetraditionalpondintensivefarmingmodelhasseriouslyhamperedthehealthydevelopmentofaquacultureinChina.Closedrecirculatingaquaculturesystemreferstotheaquacultureofwaterthroughthephysicalandchemicalmethodstodealwith,toachievetherecyclingofaquaculturewater.Biofloctechnologybreedingmodeisthroughtheaquacultureofwaterinthemicrobialassimilationandnitrificationtoachievethetreatmentofnitrogenemissionstoaquaculturewater,toachievezerochangeofwaterfarmingmodel.ThesetwofarmingmodelsareanimportantdirectionforthedevelopmentofaquaticindustryinChina.TheresultsofthebreedingofPelteobagrusfulvidracointhesetwofarmingmodesarerarelyreported.Theexperimentisdividedintothefollowingthreeparts.1.ComparativeStudyontheCultureEffectofPelteobagrusfulvidracoinBiofloctechnologyculturesystemandRecirculatingaquaculturesystemInordertostudythegrowthandimmunityofPelteobagrusfulvidracointhefieldofBiofloctechnologyculturesystemandRecirculatingaquaculturesystem,therecombinantfishculturewascarriedoutbyRecirculatingaquaculturesystem(RAS)andBiofloctechnology(BFT)(9.68±1.50)gfor60d.Theresultsshowedthatthetotalammonianitrogenandnitritenitrogenwereatalowconcentrationthroughouttheexperiment,andthetotalammoniaconcentrationintheBFTgroupwashigherthanthatintheRASgroupfromthe12thday.Attheendoftheexperiment,theterminaldensitiesoftheRASgroupandtheBFTgroupwere(4.22±0.57)and(3.45±0.65)kg/m³,respectively.Themeanmass,weightgainandspecificgrowthrateofIII 上海海洋大学硕士学位论文theRASgroupweresignificantlyhigherthanthoseoftheBFTgroup.Therewerenosignificantdifferencesingastriclipase,intestinallipase,pepsin,trypsin,alkalinephosphataseandtotalsuperoxidedismutaseactivityandplasmatriglycerideandbloodglucoselevelsbetweentheRASandBFTgroupsattheendoftheexperiment(p>0.05).TheplasmatotalproteinandtotalcholesterolintheRASgroupweresignificantlyhigherthanthoseintheBFTgroup(p<0.05).2.EffectsofdifferentfeedC/NontheBiofloctechnologyculturesystemofPelteobagrusfulvidracoInordertostudythesuitablefeedC/NforthebreedingofPelteobagrusfulvidraco,theeffectsofdifferentC/Nratiosonwaterqualityandgrowth,digestionandimmunityofPelteobagrusfulvidracowereanalyzedexperimentally.Thecontrolgroupwasfedwithbasaldiet(C/N8.0:1).Thecontrolgroupaddedglucosetothebasaldiet,andthecontrolC/Nwas12:1and16:1,respectively.Theresultsshowedthatthetotalammonianitrogenandnitritenitrogenconcentrationsweresignificantlylowerinthethreegroupsduringthewholeexperimentperiod,andthetotalammoniaconcentrationintheC/N8groupwassignificantlyhigherthanthatintheC/N12and16groups(p>0.05)attheendoftheexperiment.Threegroupsofnitratenitrogeninthewholeprocessoffarminghavecontinuedtoaccumulate.Attheendofthebreeding,therewasnosignificantdifferencebetweenthefinaldensity,thefinalmassandthebaitcoefficient.Attheendoftheexperiment,therewerenosignificantdifferencesingastriclipase,pepsinandtrypsinactivitybetweenthethreegroups(p>0.05).TherewasnosignificantdifferenceinthelipaseactivitybetweentheC/N16and12groups(p>0.05)/N8group,C/N16and8groupsweresignificantlyhigherthanthoseinC/N12group(p<0.05).3.EffectsofDifferentTotalSolidSuspensionsontheCultureofPseudobagrusfulvidracoInordertostudytheeffectsofdifferenttotalsolidsuspendedsolids(MLSS)onthegrowth,waterquality,digestionandnonspecificimmunityofPseudobagrusfulvidraco,theMLSSinBiofloctechnologyculturesystemwasstudiedinthispaper.(GroupL),350-400mg/L(groupM)and750-800mg/L(groupH),andculturedfor30days.TheresultsshowedthatdifferentMLSShadnosignificanteffectonthegrowthofPelteobagrusfulvidraco.Duringthewholeexperiment,thetotalammonianitrogenandnitritenitrogeninthethreegroupswereatalowconcentration,andthenitrateaccumulationcontinued.Attheendoftheexperiment,thegastriclipaseIV 上海海洋大学硕士学位论文activityofthethreegroupswasHgroup>Mgroup>Lgroup(p<0.05).TheactivityoflipaseingroupMandgroupHwasnotsignificantlydifferent(p>0.05)(P<0.05).TheactivityoftrypsiningroupLandgroupHwasnotsignificantlydifferent(p>0.05)andlowerthanthatingroupM(P<0.05).KEYWORDS:Biofloctechnology;Recirculatingaquaculturesystem;Carbonandnitrogenratio;Mixedliquorsuspendedsolidss;NonspecificimmuneV 上海海洋大学硕士学位论文目录摘要..................................................................................................................IABSTRACT.........................................................................................................III第一章引言.....................................................................................................11.1黄颡鱼养殖概况.....................................................................................11.2水产养殖业对环境的影响......................................................................21.3循环水养殖系统......................................................................................21.4生物絮团技术..........................................................................................31.4.1生物絮团中碳源添加...................................................................41.4.2生物絮团中悬浮固体物...............................................................4第二章生物絮团、循环水养殖模式下黄颡鱼养殖效果的对比研究...............................................................................................................................52.1.材料与方法..............................................................................................52.1.1实验鱼与饲料..............................................................................52.1.2实验设施......................................................................................52.1.3实验设计.......................................................................................62.1.4饲养管理.......................................................................................62.1.5测定指标与方法水质指标的测定...............................................62.1.6数据分析与处理...........................................................................72.2结果..........................................................................................................82.2.1养殖水质.......................................................................................82.2.2生长性能.......................................................................................92.2.3消化酶活性.................................................................................102.2.4非特异性免疫............................................................................112.2.5实验鱼血液指标........................................................................122.3讨论.......................................................................................................132.3.1RAS和BFT对黄颡鱼养殖水质的影响..................................132.3.2RAS和BFT对黄颡鱼生长的影响..........................................132.3.3RAS和BFT对黄颡鱼消化的影响..........................................142.3.4RAS和BFT对黄颡鱼免疫能力的影响..................................142.3.5RAS和BFT对黄颡鱼血液生化指标的影响..........................142.4结论...............................................................................................................15第三章不同饲料碳氮比对生物絮团黄颡鱼养殖效果的影响.......................173.1材料与方法............................................................................................17 上海海洋大学硕士学位论文3.1.1实验鱼和饲料............................................................................173.1.2实验碳源与添加方法................................................................173.1.3实验设计....................................................................................183.1.4养殖管理....................................................................................183.1.5测试方法....................................................................................183.1.6数据分析与处理........................................................................183.2结果.......................................................................................................183.2.1水质............................................................................................183.2.2黄颡鱼的生长............................................................................203.2.3黄颡鱼的消化酶活性................................................................213.2.4黄颡鱼的非特异免疫酶活性....................................................223.3讨论.......................................................................................................233.3.1不同C/N对水质的影响............................................................233.3.2不同C/N对黄颡鱼生长的影响...............................................233.3.3不同C/N对黄颡鱼消化酶活性的影响...................................233.3.4不同C/N对黄颡鱼非特异免疫酶活性的影响.......................244.结论................................................................................................................24第四章不同混合液悬浮固体对生物絮团黄颡鱼养殖效果的影响...............254.1材料与方法............................................................................................254.1.1实验鱼和饲料............................................................................254.1.2实验设施....................................................................................254.1.3实验设计.....................................................................................254.1.4饲养管理.....................................................................................264.1.5测定指标与方法水质指标的测定.............................................264.1.6数据分析与处理.........................................................................264.2结果.......................................................................................................264.2.1水质............................................................................................264.2.2黄颡鱼的生长............................................................................274.2.3消化酶活性.................................................................................284.2.4非特异性免疫............................................................................294.3讨论.......................................................................................................304.3.1不同MLSS对水质的影响........................................................304.3.2不同MLSS对黄颡鱼生长的影响...........................................304.3.3不同MLSS对黄颡鱼消化酶活性的影响...............................30 上海海洋大学硕士学位论文4.3.4不同MLSS对黄颡鱼非特异免疫酶活性的影响...................314结论.................................................................................................................31参考文献.............................................................................................................32致谢.................................................................................................................35 上海海洋大学硕士学位论文第一章引言1.1黄颡鱼养殖概况黄颡鱼（Pseudobagrusfulvidraco）隶属鲶形目，鲿科，黄颡鱼属，在我国内的各大水系都有分布，尤其是长江中下游的湖泊和水库，是以小型鱼类、虾类、昆虫等为主食的杂食性鱼类。黄颡鱼在体长20厘米之前偏向于肉食性，20厘米之后偏向于植食性。黄颡鱼常见的种类有黄颡鱼、瓦氏黄颡鱼、中间黄颡鱼、光泽黄颡鱼和长须黄颡鱼这五种，主要的养殖品种为黄颡鱼和瓦氏黄颡鱼。黄颡鱼能[1]够在0.5-38℃之间生存，其最适合的生长温度为25-28℃，最适pH值为7.0-8.4，[2]在溶氧高于4mg/L时可以正常生长。目前已在全国各地的池塘、网箱等水域中[3]成功养殖，并成为品种结构调整的主要名优鱼类之一。由于其肉质细嫩，口味鲜[4]美，营养丰富无肌间刺、经济价值高、少鱼腥味等特点而深受中国、日本、韩国等东亚国家的消费者青睐，市场潜力巨大，是我国重要的小型底层经济鱼类。随[5]着近年来市场上对黄颡鱼的需求不断加大，越来越多的养殖户选择养殖黄颡鱼。根据统计年鉴统计，我国2015年黄颡鱼养殖产量达到35.6万吨。我国的大部分地区的黄颡鱼鱼苗放养量在6000-1万尾/666.7㎡之间，有报道称在广东的黄颡鱼养殖中，鱼苗的放养量达到2万-3万尾每亩。在传统的池塘高密度养殖模式下，随着黄颡鱼养殖规模的扩大和养殖密度的提高，导致养殖水体中的残饵、粪便等有机物也随之增多，加快了细菌寄生虫的[6]繁衍，引起黄颡鱼出现了各种各样的疾病，如病毒病、细菌病和寄生虫病，造成[7-9]了严重的经济损失。“红头病”是一种最近几年流行于黄颡鱼养殖的传染性强，[10]发病率高的细菌性疾病，其致死率高达70%。最近几年黄颡鱼“红头病”的发病范围不断增大，由于在传统的池塘高密度养殖模式下养殖密度高、换水量大，鱼病暴发已成常态，给养殖户造成巨大的经济损失。传统的黄颡鱼池塘高密度养[11]殖模式已经遇到了发展的瓶颈。研究表明，在养殖密度高，养殖水质差的情况[10;12]下，一些机会致病菌很有可能成为常见的能够引起鱼病的病原体。因此，在养殖中要为黄颡鱼提供良好的养殖环境，从而避免疾病暴发造成损失。1 上海海洋大学硕士学位论文1.2水产养殖业对环境的影响近年来，我国的水产养殖业飞速发展，但是水产养殖业的生产效率仍然较低，[13]水产养殖业主要以传统的池塘粗放养殖为主。水产动物只能够吸收利用饲料中[14]蛋白质的20%-25%，不能吸收的氮元素以粪便和鱼体排氨的形式排放到水体里。池塘高密度养殖模式是目前水产养殖的最广泛的模式。在高密度的养殖条件下，大量的向养殖池塘中投入饲料，为了维持池塘中的水质，不得不提高日换水量，[15]将池塘中含有大量含氮有机物的养殖水排放。这必然导致大量的养殖废水不经处理就排放到周围水源中，使得养殖场附近的水资源被污染，严重妨碍了我国池[16]塘养殖的长足发展。水产养殖造成的氮磷污染的排放量是种植业和畜禽养殖综[17]合的4倍多，是农业污染物的最重要来源。在养殖中，由于养殖密度高，养殖水源被污染，很容易造成重大疫病的暴发[18]和流行。由于从事水产行业的人员对水产病害的认识不足，造成目前主要以化学药物来控制鱼病，而在实际用药过程中部分养殖户为了防治病虫害而加大鱼药用量，甚至使用已禁止的药品，在治疗病虫的同时也对养殖生物产生一定的伤害并残留在养殖生物体内，危害食用水产品的消费者的健康。水产品的安全问题威胁消费者们的身体健康和我国水产养殖业的健康发展，引起群众们的高度关注。近年来我国政府对农产品安全的关注也逐步转到产品质量上来，也就是由数量安[19]全（FoodSecurity）转到质量安全（FoodSafety）。水产品由于其特殊性而比其他食品存在更大的潜在风险，从多宝鱼、福寿螺、福尔马林等事件让人时刻保持对水产品安全的关注。国际贸易中因为鱼药残留超标而被退货、销毁、甚至中断[20;21]贸易往来的事件时有发生。水产养殖业对洁净水源极为依赖，养殖水源水体质量决定了水产养殖的成败及水产品安全。在目前政府对水产养殖排放管控越来越严格，洁净的养殖水源越来越少的环境下，我国的水产养殖业的发展需要新的养殖模式来取代传统的养殖模式。循环水养殖模式和生物絮团养殖模式是新兴的两种水产养殖模式，由于目前传统水产养殖模式的发展受到土地和洁净水源等因素的限制，这两种模式将成为水产养殖业未来发展的主要方向。1.3循环水养殖系统循环水养殖系统（recirculatingaquaculturesystem，RAS）是指通过生物、物2 上海海洋大学硕士学位论文理等方法对水产养殖的水体进行处理，实现水体95%以上的再利用（王峰,2013）。循环水养殖系统由于具有对养殖条件的高度可控性，具有养殖效率高，占地面积少，对水源依赖低等特点，摆脱了传统的池塘养殖模式对土地和洁净水源的依赖，是一种高投入、高产量、高效益的养殖模式。由于其具有有节水、节地、无污染、[22]可控性高、风险低、水产品安全等优点，被认为是21世纪水产养殖业发展的主[23]导方向之一，符合我国可持续发展战略。循环水养殖模式是一种高度集约化的[24]养殖方式，正在得到推广。循环水养殖系统使用机械将系统中养殖生物产生的粪便和过量投喂产生的残饵在水体循环流动过程中排出养殖水体，从而避免这些含氮有机物废物在养殖水体中被分解产生氨氮等含氮无机物。养殖水体中的总氨氮浓度一般超过5mg/L，亚硝态氮浓度达到0.1mg/L就会对水产动物造成一定危害，硝态氮长时间在长时间处[25]于较高浓度才会对水产养殖动物造成危害。养殖水体中的氨氮通过生物过滤器的生物膜上的硝化细菌消耗碱度而转化为对水产生物毒性较低的硝态氮，从而实现了对养殖水体的循环利用。在封闭式循环水养殖系统中，能够通过人工控制养殖水体的温度pH等理化指标，生产状态处在较高的强度下，实现养殖生物的高速生长，全年养殖。封闭式循环水养殖模式具有高效集约，环保易控等优点已经成为我国水产养殖业结构调整，未来发展的重要发展方向。封闭式循环水养殖系统由于其高密度、高效率和高耗能的特点，所以目前实现商业化的循环水养殖系统[23]主要是养殖能够耐高密度养殖鱼类和名贵鱼类。1.4生物絮团技术生物絮团技术（Biofloctechnology，BFT），是通过调节养殖水体中的碳氮比，促使异养细菌优势生长，通过异养细菌的同化作用将氮元素吸收合成菌体和硝化细菌的硝化作用将对鱼体毒害作用最大的总氨氮转化为毒性小的硝氮，从而维持养殖水体的水质稳定。养殖水体中的细菌藻类原生动物等形成悬浮在养殖水体中颗粒直径在0.1-1.0mm的颗粒物质，被称为生物絮团。生物絮团在养殖水体中能够[26]被一些养殖生物再次吸收利用，从而达到节省饲料的效果，降低养殖成本提高[27;28]养殖动物的抑菌活性。生物絮技术作为一种新兴的池塘生态养殖技术，可以[29]有效地解决池塘高密度养殖过程中的水污染和疾病频发等问题。目前，生物絮团技术广泛地应用于南美白对虾、罗氏沼虾等甲壳动物的养殖中。近年来生物絮团技术应用于罗非鱼、草鱼、团头鲂等养殖鱼类养殖中都有报3 上海海洋大学硕士学位论文道。生物絮团技术由于成本低和环境友好的优点而被广泛推广，被广大养殖户接受。1.4.1生物絮团养殖系统中碳源的添加[30]生物絮团养殖技术通过对C/N的调节来达到改善水质的目的。水产配合饲料的C/N比通常为10左右，而残饵粪便中的C/N比只有4-5，较低的C/N比使碳[31]源成为生物絮团的限制性因素，需要通过添加碳源来提高C/N，以实现生物絮[32]团过程。养殖水体中碳元素和氮元素含量对细菌的生长和有机物分解十分重要。当C/N较低时，异养细菌的生长会受到抑制，养殖环境中的总氨氮主要以硝化细菌的自养作用转化为硝态氮，当C/N较高时，异养细菌生长得到加强，养殖水中的总氨氮以异养细菌的同化作用为主。研究表明絮团中异养细菌对总氨氮的异养[33]同化作用要快于其硝化作用。C/N16和20时，团头鲂在的生长、消化酶活性和[34]非特异性免疫酶显著高于C/N8时。Kuhn等（2010）已经证实滤食性虾类能够很好的利用生物絮团中的营养物质，杂食性的罗非鱼也能利用絮体蛋白。C/N16-20[34]时团头鲂的增重率高于C/N8~16时。C/N为10~15时，可以促进絮团形成的同[35]时维持水质稳定，但随着C/N的增加杂交鳢的生长受到抑制。生物絮团养殖条件下黄颡鱼饲料不同C/N比对鱼体生长和消化免疫机能的影响还未见报道。1.4.2生物絮团养殖系统中悬浮固体物在生物絮团养殖系统中，混合液悬浮固体（mixedliquorsuspendedsolids,MLSS）由絮团、粪便、残饵等组成，生物絮团养殖中，MLSS对生物絮团的稳定性很重要。研究表明当MLSS为200-500mg/L时，形成的絮团较好。随着养殖系统养殖的进行，养殖水体中的悬浮固体物逐渐升高，养殖生物通过鳃排出体内的二氧化碳吸收水体中的氧气，当MLSS过高时，不仅会消耗养殖水体中的溶氧，还可能会堵[36]塞鱼鳃而导致缺氧，损害养殖生物的健康。Plinio等建议MLSS控制在500mg/L[35;以下才不会对养殖动物产生不利影响，过高的生物絮团浓度会抑制鱼类的生长37][38][35]，随着生物絮团浓度的增加，草鱼和杂交鳢的生长受到抑制。在生物絮团养殖条件下，黄颡鱼养殖水体中不同MLSS对鱼体生长和消化免疫机能的影响还未见报道。4 上海海洋大学硕士学位论文第二章生物絮团养殖模式下黄颡鱼养殖效果研究生物絮团和循环水养殖模式是解决目前传统水产养殖模式的集约化所面临瓶颈的两种新兴养殖模式，得到广大的水产养殖研究人员的关注。前人开展了很多关于虾类、罗非鱼、草鱼、鳙鱼等在生物絮团养殖模式下养殖效果的研究。封闭式循环水系统具有高密度、高效率和污染低的特点，符合我国水产养殖业的可持续发展。目前黄颡鱼的养殖模式主要是传统的池塘高密度养殖，在目前政府对水产养殖排放管控越来越严格，洁净的养殖水源越来越少的环境下，我国的水产养殖业的发展需要新的养殖模式来取代传统的养殖模式。本文研究了这两种养殖模式下在黄颡鱼养殖过程中黄颡鱼生长、消化和免疫的变化。2.1.材料与方法2.1.1实验鱼与饲料本实验所用的黄颡鱼为同一批次孵化的鱼苗，购自湖州市菱湖贤德水产养殖技术信息服务中心。运回后于上海海洋大学循环水养殖系统（RAS）中暂养至10g/尾左右。暂养阶段和实验阶段投喂的饲料是购自浙江欣欣天恩水产饲料有限公司生产的黄颡鱼膨化配合饲料。其中粗蛋白≥40.0%，粗脂肪≥5.0%，水分≤10.0%，粗纤维≤6.0%，粗灰分≤15.0%，赖氨酸≥2.0%，总磷（1.0~3.0）%（数据由厂家提供）。2.1.2实验设施采用一套循环水养殖系统（图2-1），本系统包含6个玻璃纤维养殖缸、和一组生物过滤器。每个养殖缸的养殖容积为2m³，流化床反应器容积2m³。RAS系统日循环次数为12次，以自来水作为水源。图2-1循环水养殖系统示意图5 上海海洋大学硕士学位论文a-f：养殖缸；g：转鼓式固液分离机；h：流化床反应器；i：恒温机；j：循环泵；k：生物过滤器；l：紫外线消毒器Fig:2-1Constructionofrecirculatingaquaculturesystema-f：Culturetanks；g：Drumtypesolid-liquidseparator；h：Movingbedbiofilmreactor；i:air-conditioner；j：Pump；k:Biofilter;l：Ultravioletsterilizer；2.1.3实验设计本实验分为生物絮团养殖组（BFT）和循环水养殖组（RAS）每组3个重复。在暂养前10天清理、消毒后放入自来水进行曝气，黄颡鱼暂养期间对循环水系统进行挂膜。关闭实验组循环水系统养殖缸的进出水阀门，以葡萄糖和研磨后的商品饲料作为营养来源培养絮体成熟。从暂养的黄颡鱼中选取健康、规格相近的个体1200尾用于实验，实验鱼初始体重（9.68±1.50）g，初始体长（8.06±0.85）3cm。每缸放养300尾，放养密度为1.45kg/m。2.1.4系统管理实验开始于2016年8月28日，试验周期为60天。调控实验组的初始MLSS为50mg/L。通过暂养阶段对实验鱼的摄食情况进行观察，日投饵率定为3%，实验过程中根据摄食情况调整，每天8：30、12：30、17：30分3次投喂。养殖期间，各养殖缸DO>5mg/L。实验期间通过一台750W的漩涡鼓风机为养殖缸提供溶氧和水体混合。通过添加碳酸氢钠（NaHCO）来调节PH在7.0-8.0之间。整个3实验期间实验组不换水，只补充蒸发和采样而损失的水，RAS组的日换水率低于1%。2.1.5测定指标与方法水质指标的测定水质指标测定每天下午3：00使用手持多参数水质仪（WTWMulti3430，德国）测定PH、DO、温度(T)；水样经过0.45μm的滤膜过滤后再测定总氨氮（TAN）、--亚硝态氮（NO2-N）、硝态氮（NO3-N）。TAN采用纳氏试剂分光光度法（分光光-度计型号752S06017，上海棱光技术有限公司生产，下同）。NO2-N采用盐酸萘乙-[39]二胺比色法，NO3-N采用紫外分光光度法，MLSS采用称重法。药品的纯度都为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。6 上海海洋大学硕士学位论文生长性能测定每15天取样一次，取样前24h饥饿处理，每个养殖缸随机取30尾测量体长、体重。终末密度(FD)、增重率（WGR）、特定生长率（SGR）、饵料系数（FCR）、肝体比(HSI)和成活率（SR）；计算公式如下：3终末密度（finaldensity,FD,Kg/m）=终末均质量×终末尾数/养殖水体体积增重率（weightgainrate,WGR,%）=100×(终末均质量-初始均质量)/初始均质量特定生长率（specificgrowthrate，SGR,%/d）=100×[Ln(终末均质量)-Ln（初始均质量）]/养殖天数肝体比（hepatosmaticindex,HSI,%）=(肝脏质量/体质量)×10033肥满度（conditionfactor,CF,g/cm）=100×鱼体质量/鱼体长饵料系数（feedcoefficientrate,FCR）=摄食量/（终末均质量-初始均质量）成活率（survivalrate,SR,%）=100×(终末尾数)/初始尾数实验鱼取样及消化酶和非特异性免疫酶指标的测定养殖过程中，每15天取一次样，取样前饥饿24h，每个养殖缸取鱼5尾，使用50mg/L的MS-222对鱼体进行麻醉，使用肝素钠溶液润洗过的注射器从鱼的尾静脉抽取血液，抽取的血液暂存于放置在冰盒中的抗凝管里。血液在4℃条件，4000r/min离心10min，取上层血浆-20℃保存待测。在冰袋上取出肝、胃和全肠。在低温生理盐水漂洗后，用滤纸擦干后称重，加入9倍体积（m/v）生理盐水，在冰水浴中匀浆，4℃下3000r/min的速度离心10min后取上清液。胃脂肪酶、肠脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性磷酸酶AKP、超氧化物歧化酶T-SOD使用南京建成购买的试剂盒进行测试。实验鱼血液生化指标测定血浆中的血糖GLU,甘油三酯TG,总胆固醇TC采用血清生化分析仪（beckmanAU5800，TNIBECKMANAccess2，原厂试剂）。2.1.6数据分析与处理实验数据用平均值标准差（meanSD）显示，使用spss17.0统计软件对实验数据进行ANOVA进行单因素方差分析，P＜0.005为差异显著。实验结果用Origin处理成图表。7 上海海洋大学硕士学位论文2.2结果2.2.1养殖水质在整个养殖阶段水温保持在23-30℃，DO控制在5mg/L以上，PH在7.0-8.0之间波动。图2-2生物絮团组和循环组三态氮及总氮的变化趋势Fig.2-2thechangetrendofthreestatenitrogenandTNinBFTandRAS如图2-1所示RAS组与BFT组的TAN浓度随着养殖进行而升高，分别在第27天与24天达到峰值，浓度分别为（0.717±0.047）mg/L、和（0.4±0.08）mg/L，达到峰值后BFT组与RAS组TAN浓度逐渐下降，在整体上BFT组TAN浓度显著高于RAS组。BFT组和RAS组的亚硝态氮浓度一直保持稳定，其浓度维持在0.05mg/L以下。RAS组与BFT组的硝态氮与总氮变化基本一致，在整个养殖过程中BFT组的硝态氮和总氮浓度一直在升高，在实验结束时分别达到（107±6.80）mg/L和（154±15.10）mg/L，RAS组的硝态氮浓度和总氮浓度的变化趋势大致一致，大致上维持缓慢增长，第51天达到其峰值，分别为（57.18±1.19）mg/L与（61.98±2.64）mg/L。8 上海海洋大学硕士学位论文2.2.2生长性能在实验过程中每15天时取30条鱼来测生长指标。BFT组与RAS组的成活率分别为（97.5±0.24）%与100%。RAS组的末均质量、终末密度、特定生长率和存活率均大于BFT组（p＜0.05），RAS组的饵料系数比BFT组的饵料系数低了16.04%（p＜0.05）。表2-1BFT和RAS对黄颡鱼生长的影响Tab.2-1EffectofBFTongrowthofPseudobagrusfulvidraco组别末均质量/g终末密度/（kg/m³）增重率/%特定增长率/（%/d）肥满度（g/m）肝体比/%饵料系数成活率/%FIWFDWGRSGRCFHISFCRSRaaaaaaaaBFT组24.25±4.516.91±0.14150.52±5.241.53±0.041.09±0.081.76±0.151.23±0.0497.5±0.24bbbbaabbRAS组29.64±4.058.45±0.16206.19±5.661.86±0.031.10±0.091.87±0.441.06±0.09100注：同列上标不同字母表示差异显著（p＜0.05）。下同Note：valuesinthesamerowwithdifferentsuperscriptalphabetsmeansignificantdifference(p＜0.05)。Thesameasbelow图2-3BFT组与RAS组的体重变化Fig.2-3thechangetrendofweightinBFTandRAS9 上海海洋大学硕士学位论文2.2.3消化酶活性图2-4BFT组与RAS组的胃脂肪酶与肠脂肪酶活力的变化Fig.2-4ChangeactivityofstomachandintestinelipaseinRASandBFT图2-3-1反映的BFT组与RAS组的胃脂肪酶活力变化的趋势大致一致，BFT组与RAS组的胃脂肪酶在前15天上升其峰值分别为（151±18.46）U/mg和（200.64±17.67）U/mg（＜0.05）。实验末BFT组与RAS组的胃蛋白酶活力分别为（44.74±9.47）U/mg与（55.08±10.45）U/mg（P＜0.05），在养殖结束时鱼的胃脂肪酶活力均低于初始。图2-3-2显示的BFT组与RAS组的肠脂肪酶活力变化，其中对照组在前15天其脂肪酶活力上升达到（299.99±33.00）U/mg，BFT组为（185.08±40.6）U/mg保持稳定与初始活力无显著差异。到第30天时两组肠脂肪酶活力下降，从30天到实验结束肠脂肪酶活力上升，BFT组与RAS组活力分别为（231.23±55.36）U/mg与（213.29±41.63）U/mg（P>0.05）。图2-5实验组与对照组胃蛋白酶和胰蛋白酶活力变化趋势Fig.2-5ThechangeactivityofstomachpepsaseandintestinetrypsininBFTandRAS图2-4-1显示的是BFT组与RAS组胃蛋白酶的活力变化，其中RAS组的胃蛋白酶活力从实验开始到实验结束一直呈现缓慢降低的趋势。BFT组从实验初到30天其胃蛋白酶活力降低，30天时其活力为（14.15±1.05）U/mg。第30天到实验10 上海海洋大学硕士学位论文结束BFT组的蛋白酶活力先升高后降低，45天时达到峰值为（25.78±2.18）U/mg。实验结束时BFT组与RAS组的活力分别为（15.24±2.23）U/mg与（15.28±1.69）U/mg（P＞0.05）。图2-4-2显示的是BFT组与RAS组的胰蛋白酶活力变化，两组的变化趋势大致一致，从实验时开始时到30天时两组胰蛋白酶活力均降低，分别为（3748.95±277.88）U/mg与（4027.61±301.77）U/mg从30天到60天两组胰蛋白酶活力均升高，到实验结束时其活力分别为（6606.57±477.43）U/mg与（6912.16±536.41）U/mg（p＞0.05）。2.2.4非特异性免疫图2-6BFT组与RAS组的肝脏总超氧化物歧化酶（T-SOD）与碱性磷酸酶的活力变化Fig.2-6ChangeactivityofAKPandT-SODinRASandBFT图2-6反映的是实验鱼在实验期间每15天的肝脏的非特异性免疫活性酶的变化趋势，本实验测定了总超氧化物歧化酶（T-SOD）与碱性磷酸酶（AKP）活力。2-6-A反映的是BFT组与RAS组的T-SOD活性，BFT组与RAS组的总超氧化物歧化酶的变化趋势大致相同，从养殖开始到15天总超氧化物歧化酶活性降低，在第15天达到最低值分别为（71.95±11.84）U/mg与（68.36±6.51）U/mg，从第15天到45天其总超氧化物歧化酶活性升高，45天时达到峰值，分别为(121.02±8.58)U/mg与(143.65±13.35)U/mg，第45天到实验结束总超氧化物歧化酶活力降低分别降低到(70.30±6.38)U/mg与(73.16±9.64)U/mg（p＞0.05）。2-6-B反映的是BFT组与RAS组的碱性磷酸酶的活性，BFT组与RAS组的碱性磷酸酶活性大致相同，从实验开始到30天时碱性磷酸酶活性降低，降低到(3.20±0.66)U/mg与(4.07±0.60)Umg。第30天到45天碱性磷酸酶活性升高，45天达到峰值，分别为(7.32±1.38)U/mg与(7.82±1.32)U/mg，从45天到实验结束时碱性磷酸酶活性降低，试验结束时其活性分别为(4.23±1.23)U/mg与(4.41±0.93)U/mg11 上海海洋大学硕士学位论文（P＞0.05）。2.2.5实验鱼血液指标图2-7BFT组与RAS组的血液总蛋白TP(A)、甘油三脂TG(B)、总胆固醇TC（C）和血糖GLU（D）的变化趋势Fig.2-7ChangetrendofTP,TG,TC,andGLUinBFTandRAS图2-7反映了实验鱼在实验期间每15天的血浆的总蛋白TP(A)、甘油三脂TG(B)、总胆固醇TC（C）和血糖GLU（D）的变化趋势。图2-7-A反映的是实验鱼在实验期间每15天血浆的总蛋白含量TP的变化，实验开始时总蛋白的含量为(14.1±0.20)mmol/L。RAS组60天时其血浆中的总蛋白含量升高到(15.87±1.06)mmol/L，BFT组第60天的血浆总蛋白含量为(13.98±0.68)mmol/L，RAS组与BFT组差异显著（p＜0.05）。图2-7-B反映的是实验鱼在实验期间每15天血浆中甘油三脂TG含量的变化，实验开始时甘油三酯的含量为(2.68±0.05)mmol/L，RAS组和BFT组第60天血浆甘油三酯含量分别为(5.03±1.02)和（3.66±0.87）mmol/L（p＜0.05）。在45天时，RAS组与BFT组分别达到峰值，分别为（10.56±0.43）mmol/L和（5.72±1.50）mmol/L。图2-7-C反映的是实验鱼在实验期间每15天血浆中总胆固醇TC含量的变化。实验开始时总胆固醇的含量为（1.91±0.14）mmol/L，RAS组在第60天时TC的12 上海海洋大学硕士学位论文含量为（2.35±0.21）mmol/L，BFT组在60天时TC含量为（1.73±0.29）mmol/L，实验结束时，BFT组血浆TC含量显著高于BFT组（p＜0.05）。图2-7-D反映的是实验鱼在实验期间每15天血浆中血糖GLU含量的变化。实验开始时GLU的含量为（1.36±0.05）mmol/L，BFT组在第60天时的血浆GLU含量为（3.08±0.63）mmol/L，BFT组在第60天时的血糖含量为（3.46±1.61）mmol/L，实验结束时两组都高于初始值且没有显著差异（p＞0.05）。2.3讨论2.3.1RAS和BFT对黄颡鱼养殖水质的影响[40]由于鱼类的肠道较短等因素，鱼体仅能利用饲料中20-25%的氮，导致养殖水体中存在大量的无机氮以及含氮有机物。循环水养殖系统通过固液分离机将残饵粪便等有机废物移出养殖水体，减少其在微生物的氨化作用下形成的氨氮进入养殖水体。生物絮团养殖系统能够通过生物絮团的硝化与同化作用，将水体中的总氨氮转化为菌体蛋白和毒性较小的硝态氮。在本实验中养殖阶段没有添加葡萄糖，诱使硝化细菌成为优势菌种。总体上RAS组的总氨氮含量要低于BFT组。在整个实验过程中硝态氮和总氮一直在持续增长,这说明水体的总氨氮主要通过硝化作用转化为硝态氮而存在。RAS组的硝态氮含量在达到40mg/L左右以后，硝态氮含量的增长速度降低，这是由于在循环水养殖系统中某些部位存在厌氧的环境，发生了反硝化反应。RAS组的总氮含量与硝态氮相差不大，这是由于在RAS组中，氮元素的主要转化为硝酸盐氮，BFT组的总氮要明显高于硝氮，这说明在絮凝组中部分氮素被转化为絮体蛋白而存在。2.3.2RAS和BFT对黄颡鱼生长的影响生物絮团能够有效地被滤食性鱼类和虾类吸收，从而有效地降低饲料系数，[29]降低养殖成本。循环水养殖系统通过控制养殖条件，达到养殖鱼的最适养殖条件，实现水产养殖的高效率和全年养殖。在本试验中RAS组中黄颡鱼增重率显著高于BFT组，在实验第15天BFT组与RAS组的鱼体重无显著差异，从30天开始到实验结束体重差异显著。在养殖过程中，BFT组的摄食量减小，逐渐低于RAS组，可能因此造成其生长速率低于于RAS组。RAS组的饵料系数显著低于BFT组，这可能是由于黄颡鱼不能够有效地吸收生物絮团中的菌体蛋白。13 上海海洋大学硕士学位论文2.3.3RAS和BFT对黄颡鱼消化的影响鱼类的消化酶活性能够能够反映出鱼的消化能力。鱼类的消化酶活性随着饲[41]料的改变而改变。脂肪酶活性能够反映动物消化脂肪的能力，能够反映其对脂肪的吸收利用。测定鱼体的胃和肠脂肪酶活性能够了解鱼体吸收脂肪的能力与各部分的消化状况。BFT组与RAS组的胃脂肪酶的变化趋势大致相同，在养殖开始到第15天BFT组的胃脂肪酶和肠脂肪酶活力显著低于RAS组，这是由于絮团中的细菌进入黄颡鱼的胃和肠，干扰鱼体的消化道微生物群落，影响鱼体的消化系统。肠脂肪酶在实验结束时两者并没有显著差异，但在养殖过程中第15天和第30天时RAS组的脂肪酶活性要高于BFT组，这可能是由于絮凝组的鱼体肠道受到絮体中的微生物进入肠道直到建立新的微生物平衡。胃蛋白酶和胰蛋白酶是鱼体重要的消化酶，RAS组的胃蛋白酶活性缓慢下降，试验结束时与BFT组无显著差异，BFT组在第45天时胃蛋白酶活性高于RAS组。胰蛋白酶起到消化和消炎的作用，实验中BFT组和RAS组的胰蛋白酶活性的变化趋势相差不大，试验结束时两组差异不大且高于实验开始时。2.3.4RAS和BFT对黄颡鱼免疫能力的影响鱼类在生物进化上处于低级阶段，其非特异免疫在鱼类的免疫系统中发挥着重要的作用，病原微生物和环境因子胁迫会导致鱼类的免疫力下降。正常情况下，鱼类的碱性磷酸酶AKP的活性较低且相对稳定，当肝脏受到损伤或存在胁迫时AKP活性将升高，BFT组与RAS组的碱性磷酸酶的活性的变化大致一致，试验结束时两者相差不显著。RAS组与BFT组的超氧化物歧化酶T-SOD的活力变化趋势相同，都是先下降后上升再下降的过程，养殖结束时两者相差不显著。实验中两种养殖模式下黄颡鱼的非特异性免疫能力没有显著与实验过程中总氨氮和亚硝态氮一直处于较低浓度，水质稳定有关。2.3.5RAS和BFT对黄颡鱼血液生化指标的影响血浆总蛋白含量TP是反映鱼体蛋白质代谢、健康和营养是否正常的重要指标。随着养殖的进行，BFT组的TP显著低于RAS组。这可能与前30天BFT组的消化酶活性低于RAS组，30天后BFT组的摄食量低于RAS组。血浆甘油三酯（TG）主要来源于食物中的脂肪，TG的含量过高会造成肥胖或脂肪肝，在前30天BFT组甘油三酯高于RAS组，30天后RAS组高于BFT组。14 上海海洋大学硕士学位论文这可能是由于前30天BFT组的鱼在絮凝中游动较少，少所以甘油三酯高于对照组，30天后，由于BFT组的摄食量减少，所以甘油三脂含量低于RAS组。血浆总胆固醇（TC）存在于动物的细胞和血液之中，以游离和与脂肪酸结合[42]而存在。TC和TG一样能够反映机体的脂类代谢。总体上RAS组的TC高于BFT组，与实验开始时相比，RAS组总胆固醇升高，BFT组总胆固醇降低，这与TG的变化趋势一致。鱼体在氨氮胁迫的环境下会消耗大量的血糖，血糖紊乱同样会降低鱼体的生理机能导致免疫力下降。实验过程中，血糖GLU含量呈现先上升后维持稳定的趋势，说明鱼体在BFT养殖系统中很快适应了生物絮团的生存环境。实验结束时RAS组和BFT组的血糖含量相差不显著且高于实验开始时。2.3.6RAS和BFT养殖系统的成本循环水养殖系统的构建成本较高。据韩云峰等的调查，建筑面积610.5㎡的循[43]环水养殖车间建筑费用为36.5万元，水处理设备花费122.3万元，平均2003.3元/㎡。对于生物絮团养殖系统的建设成本未见报道，但是由于生物絮团养殖系统不需要建设水处理设备，因此其构建成本远远低于循环水养殖系统。循环水养殖系统的运行成本较高。研究表明循环水养殖系统每生产1Kg水产[44][45]品需耗电7.54KW，节能型的循环水养殖系统每生产1Kg水产品耗电3.81KW。循环水养殖系统的耗能主要在于养殖水体的循环、增氧和控温。生物絮团养殖系[46]统养虾的增氧设备功率为20~40KW/h㎡。大菱鲆循环水养殖系统的养殖成本为[47][48]42.06元/Kg，珍珠龙胆循环水养殖系统的养殖成本为44元/Kg，由于循环水养殖系统的建设和运行成本较高，大多用于比较名贵的、适于高密度养殖的品种。生物絮团养殖系统仅需要建设暴气设施，其建设成本远低于循环水养殖系统。本实验中循环水养殖系统的水处理装置的运行功率约为400W，在60天的养殖过程中比絮凝养殖系统多使用约576KWh的电能。2.4结论本实验中采用两种养殖模式对黄颡鱼进行养殖。从水质指标、黄颡鱼的生长、15 上海海洋大学硕士学位论文消化酶活性、非特异性免疫酶活性和血液生化指标等方面来比较两种养殖系统中黄颡鱼的养殖效果。在整个实验期间总氨氮和亚硝态氮一直处于较低浓度，从第12天开始BFT组总氨氮浓度高于RAS组。实验结束时RAS组和BFT组的终末密度分别为（4.22±0.57）和（3.45±0.65）kg/m³，RAS组的末均质量、增重率和特定生长率均显著高于BFT组。RAS组的饵料系数显著低于BFT组，这可能是由于黄颡鱼不能够有效地吸收生物絮团中的菌体蛋白。RAS和BFT组的胃脂肪酶、肠脂肪酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性磷酸酶和总超氧化物歧化酶活性和血浆甘油三酯和血糖含量在实验结束时没有显著差异。RAS组的血浆总蛋白和总胆固醇显著高于BFT组。两种养殖模式都能够很好的应用于黄颡鱼的养殖中，虽然循环水养殖模式下黄颡鱼的生长的速度快于生物絮团养殖模式，但是循环水养殖系统建设成本和运行成本都远高于生物絮团养殖系统，所以对于黄颡鱼生物絮团养殖模式更具有推广价值。16 上海海洋大学硕士学位论文第三章不同饲料碳氮比对生物絮团黄颡鱼养殖效果的影响[30]生物絮团技术是通过对C/N的调节来达到改善水质的目的。水产配合饲料的C/N比通常为10左右，而残饵粪便中的C/N比只有4-5，较低的C/N使得有机[31]碳源成为生物絮团的限制性因素，需要添加有机碳源来提高C/N，以实现生物[32]絮团过程。养殖水体中的C/N对细菌的生长和有机物的分解十分重要。当C/N较低时，异养细菌的生长会受到抑制，养殖环境中的TAN主要以硝化细菌的自养作用转化为硝态氮，当C/N较高时，异养细菌生长得到加强，养殖水中的TAN以异养细菌的同化作用为主。在生物絮团条件下黄颡鱼养殖水体中不同C/N比对黄颡鱼鱼体生长、消化和免疫机能的影响还未见报道。在生物絮团条件下黄颡鱼养殖水体中不同C/N比对黄颡鱼鱼体生长和消化免疫机能的影响还未见报道。3.1材料与方法3.1.1实验鱼和饲料本实验所用的黄颡鱼为同一批次孵化的鱼苗，购自湖州市菱湖贤德水产养殖技术信息服务中心。鱼苗运回后在上海海洋大学循环水养殖系统（RAS）中暂养。从循环水养殖系统中选取规格一致，身体健壮的鱼来进行本实验，选取的鱼的规格为（56.43±8.04）g。暂养阶段和实验阶段投喂的饲料是购自浙江欣欣天恩水产饲料有限公司生产的黄颡鱼膨化配合饲料（C/N=8.0）。其中粗蛋白≥40.0%，粗脂肪≥5.0%，水分≤10.0%，粗纤维≤6.0%，粗灰分≤15.0%，赖氨酸≥2.0%，总磷（1.0-3.0）%（数据由厂家提供）。3.1.2实验碳源与添加方法实验中使用的葡萄糖为无水葡萄糖，有效成分为99.9%。对照组只投喂基础饲料，实验组通过向水体中投入葡萄糖的添加量来调节C/N分别为12、16，共3组，[49]每组两个重复。这次实验中有机碳源的添加量参考Avnimelech总结的生物絮团养殖中C/N公式来计算，根据投喂的饲料量来调整葡萄糖的添加量以维持各组的C/N。在喂食2小时后，将葡萄糖溶解在少量的养殖水中后均匀加入养殖缸中。17 上海海洋大学硕士学位论文3.1.3实验设计实验分为3组，分别是C/N8、12、16，为每组2个重复。将循环水养殖系统关闭，将6个玻璃纤维养殖缸清洗消毒后放入清洁的自来水，曝气7天后通过加热器对每个养殖缸进行加热，维持水体温度为18-23℃。以葡萄糖和研磨后的商品饲料作为营养来源培养絮体成熟。选取个体健康，规格齐整的黄颡鱼330条，体重为（56.43±8.04）g，每缸随机放养55条，初始密度为（1.55±0.22）kg。将黄颡鱼分缸后，将培养好的絮团加入到每个养殖缸中，控制其悬浮固体颗粒物为50mg/L左右。3.1.4养殖管理实验在上海海洋大学循环水养殖系统中进行，养殖周期为60天。通过暂养阶段对实验鱼的摄食情况进行观察，日投饵率定为3%，实验过程中根据摄食情况调整。养殖期间，各养殖缸DO>5mg/L。实验期间通过一台750W的漩涡鼓风机为养殖缸提供溶氧和水体混合。通过添加碳酸氢钠（NaHCO）来调节PH在7.0-8.03之间。整个实验期间不换水，只补充蒸发和采样而损失的水。3.1.5测试方法各指标的测定同上章。3.1.6数据分析与处理实验数据用平均值标准差（meanSD）表示，采用spss17.0统计软件对实验数据进行ANOVA进行单因素方差分析，P＜0.005为差异显著。实验结果用Origin处理成图表。3.2结果3.2.1水质在整个试验阶段通过加热器将温度控制在18-23℃，DO控制在5mg/L以上，PH在7.0-8.0之间波动。整个实验期间使用碳酸氢钠控制养殖水体中的碱度和pH。18 上海海洋大学硕士学位论文图3-1生物絮团C/N为8、12、16时三态氮浓度变化趋势Fig.3-1ThechangetrendofthreestatenitrogeninBFTofC/N8、12、16如图3-1在C/N比分别为8、12、16时三态氮浓度变化趋势在大体上是一致的。从图3-1A可以看出在初始时总氨氮的含量很高，是整个实验过程中的峰值，这是由于在黄颡鱼在放入养殖缸后为了让鱼体适应性的养殖环境没有立即向养殖缸中加入絮体，导致在一定程度上的TAN积累。在加入已经培养成熟的絮体后，养殖水体中的TAN快速下降到0.25mg/L以下。第四天之后总氨氮缓慢升高，总体上三组的总氨氮都保持在一个相对较低的水平。在第24天之后，C/N12和16组的总氨氮稳定在0.5mg/L左右直到实验结束，C/N8组的TAN要稍高于其他两组。从图3-1B可以看出在实验开始时亚硝态氮在试验开始时有一个快速下降的过程，这些亚硝态氮是加入絮团前积累产生的，加入絮团后各组亚硝态氮快速降低。8天和4天时C/N8和16组的亚硝态氮浓度又开始升高，两组在第16天同时达到峰值，分别为（0.16±0.02）mg/L和（0.12±0.01）mg/L，之后两组的亚硝酸盐氮浓度快速下降，第24天之后三组亚硝酸盐氮浓度都维持在0.05mg/L以下。从图3-1C可以看出在总体上C/N8、12和16组的硝态氮浓度都在稳定增加，其中C/N12和16组在试验结束时硝态氮的浓度分别为（81.88±2.78）mg/L和（85.25±1.35）mg/L，C/N8组在结束时硝态氮的浓度为（93.78±3.33）mg/L。在整个实验过程中19 上海海洋大学硕士学位论文三组的硝态氮变化趋势基本一致。3.2.2黄颡鱼的生长在实验过程中，每15天饥饿24小时后取8条鱼，测量其体长体重。图3-2生物絮团中碳氮比分别为8、12和16时的体重变化趋势Fig.3-2ThechangetrendofweightinBFTofC/N8、12and16图3-2反映了整个实验过程中黄颡鱼在生物絮团养殖下C/N投入分别为8、12、16时黄颡鱼的体重变化情况。其中C/N为8、12和16时其终末均质量分别为（116.15±10.38）、（113.13±9.31）和（120±9.22）g，三组的末均重之间没有显著差异（p＞0.05），在实验结束时其密度分别为（2.58±0.40）、（2.42±0.41）和（2.5±0.40）Kg/m³（p＞0.05）。在整个养殖过程中成活率为100%，其特定生长率、增重率、肥满度和饵料系数都没有显著差异（p＞0.05）。在C/N分别为8、12和16时其肝体比分别为（1.75±0.16）、（1.39±0.20）和（1.31±0.16）%，C/N12和16组显著低于C/N8组（p＜0.05）。表3-1生物絮团中C/N8、12、16时对黄颡鱼生长的影响Tab3-1EffectofC/N8、12、16onBFTtogrowthofPseudobagrusfulvidraco组别末均质量/g终末密度（kg/m³）增重率/%特定增长率/（%/d）肥满度/（g/m）肝体比/%饲料系数成活率/%FIWFDWGRSGRCFHISFCRSRaaaaaaaaC/N8116.15±10.382.58±0.40112.41±18.401.26±0.151.80±0.121.75±0.161.11±0.15100aaaaabaaC/N12113.13±9.312.42±0.41109.76±16.501.21±0.131.84±0.111.39±0.201.11±0.14100aaaaabaaC/N16120.48±9.222.50±0.40105.85±16.341.20±0.131.81±0.121.31±0.161.04±0.1410020 上海海洋大学硕士学位论文3.2.3黄颡鱼的消化酶活性图3-3生物絮团中碳氮比分别为8、12和16时胃脂肪酶（A）与肠脂肪酶（B）活力的变化Fig.3-3ThechangeactivityofstomachandintestinelipaseinBFTofC/N8、12and16如图3-3-A中所示，C/N为分别为8、12和16时，各组鱼体的胃脂肪酶活性都呈现先上升后下降的趋势，C/N16组第30天达到峰值，峰值为（854.33±94.41）U/mg，C/N8和12组在第45天达到峰值，峰值分别为（971.24±91.15）和（737.20±85.28）U/mg。在试验结束时C/N8、12和16组的胃蛋白酶活性为（350.11±25.33）338.99±22.64）和（346.84±60.93）U/mg，三组之间没有显著差异（p＞0.05）。如图3-3-B中所示，生物絮团养殖模式下C/N分别为8、12和16时三组的肠脂肪酶活性都呈先下降，第30天时再上升的趋势。试验结束时C/N8、12和16的肠脂肪酶活性分别为（75.59±15.47）、（93.57±9.47）和（97.84±9.14）U/mg，生物絮团C/N16与12组肠脂肪酶活性要显著高于C/N8组。图3-4生物絮团中C/N分别为8、12和16时胃蛋白酶和胰蛋白酶活力变化Fig.3-4ThechangeactivityofstomachpepsaseandintestinetrypsininBFTofC/N8、12and16图3-4反映的是生物絮团养殖模式下C/N为8、12和16时黄颡鱼的胃蛋白酶和肠胰蛋白酶活性的变化。其中3-4-A是黄颡鱼的胃蛋白酶活力变化，三组都呈先增加到第30天后维持稳定的趋势。实验结束时C/N为8、12和16的三组的胃蛋白活性分别为（13.43±0.38）、（13.23±0.80）和（14.02±2.63）U/mg，实验结束21 上海海洋大学硕士学位论文时三组没有差异（p＞0.05）。图3-4-B反映的是C/N为8、12和16时黄颡鱼的胰蛋白酶活性的变化，由图中可以看出在整个养殖过程中胰蛋白酶的活性呈现先下降后维持稳定的趋势，在试验结束时C/N为8、12和16三组的胰蛋白酶活性分别为（2131.32±325.44）、（1994.43±242.12）和（2194.21±581.92）U/mg，三组之间没有显著差异（p＞0.05）。3.2.4黄颡鱼的非特异免疫酶活性图3-5生物絮团中碳氮比分别为8、12和16时肝脏总超氧化物歧化酶（T-SOD）与碱性磷酸酶活力变化趋势Fig.3-5ThechangeactivityofAKPandT-SODinBFTofC/N8、12and16图3-5反映的是实验过程中每15天生物絮团养殖模式中C/N分别为8、12和16时肝脏中总超氧化物歧化酶T-SOD和碱性磷酸酶AKP的活力。图3-5-A反映的是黄颡鱼在实验期间肝脏碱性磷酸酶活力的变化趋势。总体上三组都呈先下降后上升的趋势，实验结束时生物絮团中C/N8、12和16时碱性磷酸酶活性分别为（5.51±1.52）、（3.41±0.27）和（5.05±1.71）U/mg，其中C/N16、8时酶活性之间没有显著差异（p＞0.05），显著高于C/N12时。图3-5-B反映的是黄颡鱼肝脏在实验期间T-SOD活力的变化。C/N8组的T-SOD活性在第15天时达到峰值后下降，峰值为（259.58±42.94）U/mg。C/N12组的T-SOD活性先下降，30天时达到最低值（104.29±25.65）U/mg。C/N16组的T-SOD活性在整个实验过程中一直维持稳定。实验结束时C/N8、12和16三组的T-SOD的活力分别为（174.82±34.70）、（136.45±31.49）和（203.91±50.15）U/mg，三组之间T-SOD活力C/N16＞C/N8＞C/N12（p＞0.05）。22 上海海洋大学硕士学位论文3.3讨论3.3.1不同C/N对水质的影响在集约化养殖中，水体中的总氨氮和亚硝态氮含量是影响养殖环境主要胁迫[50][49]因子。C/N对生物絮团的形成有很重要的影响。当C/N高于15时，异养细菌吸收TAN转化为自身菌体蛋白。C/N为16和12时，生物絮团能够以异养同化的方式转化TAN为菌体蛋白,其转化TAN的效率高于硝化细菌的自养硝化，同时也导致絮团的含量较高，有利于水质的稳定。C/N为8时，养殖水体中的TAN以硝化细菌的硝化作用转化为硝态氮为主。C/N8时，亚硝态氮一直处在较低浓度，C/N12和16时亚硝酸盐氮先升高后降低，这是由于异养微生物大量繁殖，加快了含氮有机物的分解，同时可能对硝化细菌的硝化造成一定的抑制，造成亚硝态氮一定程度上的积累。C/N为12和16时，其硝态氮含量要低于C/N8时，这说明有一部分的硝态氮转化为菌体蛋白。在生物絮团养殖中，三组的硝态氮的浓度都有积累，这说明在C/N为12和16时细菌的自养硝化作用一直存在。3.3.2不同C/N对黄颡鱼生长的影响在C/N为8、12和16时黄颡鱼的末质量和末密度没有显著差异。这说明投喂饲料的C/N不是影响黄颡鱼生长的重要因素。而C/N8时肝体比要显著高于C/N12和16时，这可能是由于C/N为12和16时。3.3.3不同C/N对鱼消化酶活性的影响[41]消化酶活性能够能够反映出鱼的消化能力。有研究表明絮团微生物被摄食进入消化系统会干扰平衡的、产生或诱导产生消化酶的微生物菌群，从而影响鱼体的消化酶活性。实验结束时三组的胃脂肪酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶活性没有显著差异，这说明C/N能够在一定程度影响黄颡鱼的酶活性。胃蛋白酶和胰蛋白酶活性在实验结束时分别显著高于和低于实验初始时，这说明黄颡鱼的一些微生物重新达到平衡。实验中结束时C/N12和16组的肠脂肪酶活性显著高于C/N8组，可能是由于絮团中的异养微生物的进入肠道后先造成肠道菌群紊乱，之后形成新的平衡，C/N12和16时形成的絮团中的某些微生物能够促进黄颡鱼的肠脂肪酶活性。23 上海海洋大学硕士学位论文3.3.4不同C/N对鱼非特异免疫酶活性的影响鱼类在生物进化上处于低级阶段，其非特异免疫在鱼类的免疫系统中发挥着重要的作用，病原微生物和环境因子胁迫会导致鱼类的免疫力下降。养殖水体中[51;52]病原微生物和总氨氮或亚硝态氮胁迫会引起鱼的免疫酶活性降低。正常情况下，鱼类的碱性磷酸酶AKP的活性较低且相对稳定，当肝脏受到损伤或存在胁迫时AKP活性将升高。实验结束时C/N8和16组的碱性磷酸酶和总超氧化物歧化酶活性显著高于C/N12组，这可能与不同C/N下养殖系统中的絮团的细菌组成的不同有关。3.4结论本实验研究了黄颡鱼生物絮团养殖所适宜的饲料C/N,实验分析了不同饲料C/N比对水质、黄颡鱼生长、消化酶活性和非特异免疫酶活性的影响。整个实验期间三组的总氨氮和亚硝态氮一直处于较低浓度，实验结束时C/N8组的总氨氮浓度显著高于C/N12和16组。三组的硝态氮在整个养殖过程中都持续积累。养殖结束时，终密度、末均质量、饵料系数、胃脂肪酶活性、胃蛋白酶活性和胰蛋白酶活性没有显著差异，C/N16和12组的肠脂肪酶活性没有显著差异且显著高于C/N8组，C/N16和8组的碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性都显著高于C/N12组。本实验表明黄颡鱼在生物絮团养殖系统中，饲料碳源添加量对黄颡鱼的生长没有显著影响。24 上海海洋大学硕士学位论文第四章不同混合液悬浮固体对生物絮团黄颡鱼养殖效果的影响在生物絮团养殖系统中，混合液悬浮固体（mixedliquorsuspendedsolids,MLSS）由絮体、粪便、残饵等组成，生物絮团养殖中，MLSS对絮团的稳定性很重要。研究表明当MLSS为200-500mg/L时，形成的絮体较好。随着絮凝养殖系统养殖的进行，养殖水体中的悬浮固体物逐渐升高，养殖动物通过鳃来排出体内的二氧化碳吸收水体中的氧气，当MLSS过高时，不仅会消耗养殖水体中的溶氧，还可能会堵塞鱼鳃而导致养殖动物缺氧，损害养殖生物的健康。本实验研究了在不同的MLSS下，生物絮团对黄颡鱼的生长、消化和免疫的影响。4.1材料与方法4.1.1实验鱼和饲料本实验所用的黄颡鱼为同一批次孵化的鱼苗，购自湖州市菱湖贤德水产养殖技术信息服务中心。运回后在上海海洋大学循环水养殖系统（RAS）中暂养尾。从暂养的鱼中选取个体健壮、规格一致的黄颡鱼（27.43±2.98）315条。暂养阶段和实验阶段投喂的饲料是购自浙江欣欣天恩水产饲料有限公司生产的黄颡鱼膨化配合饲料。其中粗蛋白≥40.0%，粗脂肪≥5.0%，水分≤10.0%，粗纤维≤6.0%，粗灰分≤15.0%，赖氨酸≥2.0%，总磷（1.0~3.0）%（数据由厂家提供）。4.1.2实验设施选用上部为柱体下部为圆锥状的玻璃纤维养殖缸，养殖缸的直径为110cm，全高为120cm，下部椎体高30cm，养殖体积为600L。实验期间通过一台750W的漩涡鼓风机为养殖缸提供溶氧和水体混合，各养殖缸的DO>5mg/L。4.1.3实验设计实验分为3个不同的MLSS浓度，分别为50-100mg/L、350-400mg/L和750-800mg/L，分别为L（Low）M（Medium）H（High）组，每组3个重复，共9个养殖缸。养殖缸的MLSS每4天调节一次，在投喂4小时以后将养殖水用水泵25 上海海洋大学硕士学位论文泵出，沉降后将上清液抽回养殖缸。在实验开始前，以葡萄糖和研磨后的商品饲料作为营养来源培养生物絮团成熟。对养殖缸清洗消毒后冲洗干净，注满自来水后曝气一周，用500W的加热器控制水温18-23℃。选取315条身体健壮、规格一致的黄颡鱼，体重为（27.43±2.98）g。每缸放养35条，初始密度为（1.60±0.17）Kg/m³。4.1.4饲养管理实验开始于2017年2月28日，试验周期为30天。在实验开始前，采用研磨的商品饲料作为氮源，添加葡萄糖作为碳源，培养生物絮团，直至絮体成熟。通过暂养阶段对实验鱼的吃食情况的观察，初始日投饵率定为3%。通过添加碳酸氢钠（NaHCO）来调节PH在7.0-8.0之间。整个实验期间不换水，只补充蒸发和3采样而损失的水。4.1.5测定指标与方法水质指标的测定各指标的测定同第二章4.1.6数据分析与处理实验数据用平均值标准差（meanSD）表示，采用spss17.0统计软件对实验数据进行ANOVA进行单因素方差分析，P＜0.005为差异显著。实验结果用Origin处理成图表。4.2结果4.2.1水质在整个实验中，水温稳定在18-23℃，溶氧控制在5mg/L以上。26 上海海洋大学硕士学位论文图4-1生物絮团中不同MLSS时三态氮的浓度变化趋势Fig.4-1thechangetrendofthreestatenitrogenofBFTindifferentMLSS如图4-1所示，BFT中L、M和H三组的三态氮变化。图4-1-A反映的是总氨氮的浓度变化。其中中L、M和H三组氨氮的变化趋势一致，总体上L组的总氨氮浓度最高。在整个实验过程中，总氨氮含量都处在较低的状态，L组在第20天达到峰值（0.83±0.094）mg/L，M组在第8天达到峰值（0.80±0.03）mg/L，H组在第24天时达到峰值（0.76±0.06）mg/L。图4-1-B反映的是亚硝酸盐氮浓度的变化，三组总体上低于0.1mg/L,L组在第16天达到峰值（0.08±0.01）mg/L，M组在第24天达到峰值（0.04±0.04）mg/L，H组在第12天达到峰值（0.02±0.03）mg/L。图4-1-C反映的是硝酸盐氮的变化，总体上硝酸盐氮的浓度随着养殖的进行而积累，在实验结束时L组、M组和H组的（93.72±6.12）、（110.67±12.41）和（116.98±2.08）mg/L,H组和M组没有差异（p＞0.05），且高于于L组（p＜0.05）。4.2.2黄颡鱼的生长在养殖过程中，每15天取8条黄颡鱼，测其生长指标，测量前饥饿24小时。图4-2生物絮团中不同MLSS下鱼体重变化趋势Fig.4-2ThechangetrendofweightinBFTindifferentMLSSL组、M组和H组的成活率都为100%，其终末体重分别为（53.42±11.08）、（55.99±14.52）和（56.24±14.64）g三组之间没有显著差异（p＞0.05），终末养27 上海海洋大学硕士学位论文殖密度分别为（2.76±0.57）、（2.89±0.75）和（2.91±0.76）Kg/m³，没有显著差异（p＜0.05）。表2-1不同MLSS对黄颡鱼生长的影响Tab2-1EffectofdifferentMLSSongrowthofPseudobagrusfulvidraco组别末均质量/g终末密度/（kg/m³）增重率/%特定增长率/（%/d）肥满度/（g/m）肝体比/%饲料系数成活率/%FIWFDWGRSGRCFHISFCRSRaaaaaaaaL组53.42±11.082.76±0.5794.81±29.552.22±0.341.75±0.131.30±0.031.25±0.31100aaaaabaaM组55.99±14.522.89±0.75104.17±42.102.38±0.411.69±0.161.21±0.021.27±0.34100aaaaacaaH组56.24±14.642.91±0.76105.10±42.552.39±0.421.66±0.141.12±0.021.26±0.331004.2.3实验鱼的消化酶活性图4-3生物絮团中不同MLSS时胃脂肪酶（A）与肠脂肪酶（B）活力的变化Fig.4-3ThechangeactivityofstomachandintestinelipaseinBFTofdifferentMLSS图4-3-A显示的是不同MLSS下黄颡鱼的胃脂肪酶活性变化趋势。L组、M组和H组的胃脂肪酶活性第30天时分别为（131.06±18.82）、（165.51±10.07）和（211.86±74.41）U/mg，H组＞M组＞L组（p＜0.05）。图4-3-B反映的是不同MLSS时肠脂肪酶活性的变化，L组、M组和H组的肠脂肪酶活性先升高后降低，实验结束时，其活性分别为（48.14±12.32）、（68.78±14.35）和（69.60±13.76）U/mg,M组和H组的肠脂肪酶活性差异不显著（p＞0.05），且高于L组（p＜0.05）。28 上海海洋大学硕士学位论文图4-4生物絮团中不同MLSS时胃蛋白酶和胰蛋白酶活力变化Fig.4-4ThechangeactivityofstomachpepsaseandintestinetrypsininBFTofdifferentMLSS图4-4-A反映的是BFT条件下不同MLSS对胃蛋白酶活性的影响。L组、M组和H组在第30天其活性分别为（8.41±1.60）、（17.20±3.87）和（11.77±3.29）U/mg，胃蛋白酶活性M组＞H组＞L组（p＜0.05）。图4-4-B反映的是BFT条件下不同MLSS对黄颡鱼肠胰蛋白酶活性的影响。三组都呈先上升后下降的趋势，L组、M组和H组在第30天时其活性分别为（1143.10±257.14）、（1913.21±1066.35）和（1047.38±205.37）U/mg，M组显著高于L组和H组（p＜0.05），L组和H组相差不显著（p＞0.05）。4.2.4实验鱼的肝脏非特异性免疫酶图4-5生物絮团中不同MLSS时肝脏碱性磷酸酶与总超氧化物歧化酶（T-SOD）的活性变化Fig.4-5ThechangeactivityofAKPandT-SODinBFTofdifferentMLSS图4-5反映的是不同MLSS对鱼体肝脏AKP和T-SOD活性的变化。图4-5-A反映的是不同MLSS对鱼体肝脏AKP活性的影响，在第30天时其活性分别为（3.58±0.83）、（3.59±0.68）和（3.21±0.71）U/mg，三组之间没有差异（p＞0.05）。图4-5-B反映的是T-SOD活性的变化，在第30天时，L组、M组和H组的活性分别29 上海海洋大学硕士学位论文为（107.03±14.22）、（99.47±8.50）和（112.55±18.31）U/mg，三组之间没有差异（p＞0.05）。4.3讨论4.3.1不同MLSS对水质的影响在集约化养殖中，水体中的总氨氮和亚硝态氮含量是影响养殖环境主要胁迫[50]因子。BFT对养殖水体处理在于其中微生物的同化吸收作用和硝化转化作用。在BFT养殖系统中，养殖总氨氮和亚硝态氮都得到的很好的控制。三组的总氨氮浓度在养殖结束时L组要稍高于M组和H组，这可能是由于L组MLSS低，需要更长的时间来处理黄颡鱼产生的氨氮，所以总氨氮浓度稍高。三组的亚硝态氮浓度总体上低于0.1mg/L,总体上L组要高于M组和H组，这可能是由于MLSS过低时会导致生物絮团不稳定。三组的硝态氮在整个养殖过程中一直在持续增加，M组和H组差异不显著且高于L组，可能是由于MLSS低时养殖水体中絮团的硝化作用较慢。4.3.2不同MLSS对黄颡鱼生长的影响[53]有研究表明生物絮团中MLSS控制在500mg/L以下不会影响水产动物。当实验结束时，3组的黄颡鱼末均重差异不显著，这说明在在MLSS较高的水体中，黄颡鱼也能正常生长。L组的饵料系数显著高于M组和H组，可能是由于在M组和H组中MLSS高于L组，其中的絮团能够有效地被黄颡鱼摄食。4.3.3不同MLSS对黄颡鱼消化酶活性的影响脂肪酶活性能够反映水产生物对脂肪消化吸收的重要酶类。有研究表明絮团微生物被摄食而进入消化系统会干扰平衡的、产生或诱导产生消化酶的微生物菌群，从而影响鱼体的消化酶活性。实验结束时三组的胃脂肪酶活性H组＞M组＞L组，肠脂肪酶活性M组和H组显著高于L组，这可能与黄颡鱼摄入的絮团的量有关。胃蛋白酶活性与胰蛋白酶活性是鱼类的两种重要的消化酶。实验结束时胃蛋白酶活性M组＞H组＞L组，胰蛋白酶活性M组大于L组和H组，这说明MLSS含量对黄颡鱼的消化酶活性有显著影响。30 上海海洋大学硕士学位论文4.3.4不同MLSS对鱼肝脏非特异免疫酶活性的影响AKP是一种能够参与动物免疫的水解酶，T-SOD能够清除活性氧自由基，具[54]有抗氧化作用，是反映水产动物非特异性免疫活性的重要指标。实验结束时三组的AKP和T-SOD活性没有显著差异，这说明生物絮团养殖系统中中不同MLSS对黄颡鱼的非特异免疫酶活性。4.4结论本实验研究了生物絮团养殖系统中，不同混合液悬浮固体（MLSS）对黄颡鱼的生长、水质、消化酶活性和非特异免疫酶活性的影响，本实验通过调节生物絮团养殖系统中的MLSS浓度来研究不同MLSS对黄颡鱼生长的影响。整个实验期间三组的总氨氮和亚硝态氮一直处于较低浓度，硝态氮持续积累。实验结束时，三组的胃脂肪酶活性为H组＞M组＞L组，M组和H组的肠脂肪酶活性差异不显著且高于L组，三组的胃蛋白酶活性为M组＞H组＞L组，L组和H组的胰蛋白酶活性差异不显著且低于M组。黄颡鱼的消化酶活性的变化可能是由于黄颡鱼摄食生物絮团引起的。本实验表明在生物絮团养殖系统中，养殖水体中的MLSS浓度对黄颡鱼的生长没有显著影响，对黄颡鱼的消化酶活性有显著影响。31 上海海洋大学硕士学位论文参考文献[1]陈钰,李一方.黄颡鱼山塘集约化养殖技术[J].现代农业科技,2015,(11):281-282.[2]陈琴,章太卓,徐夏声.黄颡鱼耗氧率与窒息点的初探[J].当代水产,2001,26(3):9-11.[3]易家新,杨军,董舰峰,等.黄颡鱼大规格苗种培育方法对比试验[J].长江大学学报(自科版),2016,13(21):25-28.[4]甘炼,马旭洲,张文博,等.瓦氏黄颡鱼和黄颡鱼仔、稚、幼鱼生长的比较[J].华南农业大学学报,2008,29(3):71-74.[5]文远红,黄燕华,王国霞,等.蝇蛆粉替代鱼粉对黄颡鱼抗氧化指标、消化酶活性及前肠、肝胰脏组织结构的影响[J].饲料工业,2015,36(4):29-35.[6]顾红平,唐玉华.黄颡鱼8种常见疾病症状及具体防治措施[J].当代水产,2016,(6):70-71.[7]王文彬,夏维福.黄颡鱼的寄生虫病及其防治[J].当代水产,2001,(7):34-35.[8]冯辉,何云崇.黄颡鱼鱼病的防治技术[J].动物科学与动物医学,2002,19(3):57-58.[9]吴萍,崇加荣.黄颡鱼养殖中常见疾病及其防治[J].水生态学杂志,2003,23(2):65-66.[10]胡宗云,宋文华,张涛,等.黄颡鱼“红头病”病原菌蜡状芽孢杆菌分离鉴定及药敏分析[J].水产学杂志,2016,29(4):33-37.[11]刘德建.夏季黄颡鱼“一点红”病的诊断与防治[J].科学养鱼,2013,V29(12):59-60.[12]王忠敏,黄惠莉.一株罗非鱼出血病致病菌的分离与鉴定及组织病理观察[J].华侨大学学报(自然版),2012,33(6):660-666.[13]杨志强.环境因子对循环水养殖系统中生物膜净化效率的影响[D].中国海洋大学,2015.[14]CrabR,AvnimelechY,DefoirdtT,etal.Nitrogenremovaltechniquesinaquacultureforasustainableproduction[J].Aquaculture,2007,270(1–4):1-14.[15]吴伟,范立民.水产养殖环境的污染及其控制对策[J].中国农业科技导报,2014,33(2):26-34.[16]刘振庆.浅谈我国淡水池塘养殖面临的环境问题及对策[J].科学种养,2014,(12).[17]李翠梅,张绍广,姚文平,等.太湖流域苏州片区农业面源污染负荷研究[J].水土保持研究,2016,23(3):354-359.[18]李立华.我国水产养殖病害控制技术现状与发展趋势[J].黑龙江科技信息,2016,(8):274-274.[19]范小建.中国农产品质量安全的总体状况[J].农产品质量与安全,2003,(1):4-6.[20]郑建明.欧美国家水产品质量安全政府规制经验分析[J].世界农业,2016,(4):125-129.[21]邵征翌.中国水产品质量安全管理战略研究[D].中国海洋大学,2007.[22]PiedrahitaRH.Reducingthepotentialenvironmentalimpactoftankaquacultureeffluentsthroughintensificationandrecirculation[J].Aquaculture,2003,226(1–4):35-44.[23]宋奔奔,吴凡,倪琦.国外封闭循环水养殖系统工艺流程设计现状与展望[J].渔业现代化,2012,39(3):13-18.[24]牛化欣,常杰,贾玉东,等.封闭式循环水养殖系统工程的构建与集成[J].江苏农业科学,2015,43(4):237-238.32 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上海海洋大学硕士学位论文致谢本论文是在导师谭老师的悉心指导下完成的。值此论文完成之际，谨向谭老师致以崇高的敬意和诚挚的感谢！在三年的生涯中，谭老师在学习、工作和生活上给予我无微不至的关心和帮助，从论文的选题、资料查询查询、方案设计、实施以及论文的撰写、修改、定稿，都给予了耐心的指导和无私的帮助。导师严谨的治学态度、诲人不倦的工作精神和平易近人的为人品质使我受益终身。特别感谢罗老师在三年的生涯中在学习和生活上给予的无私帮助和指导，罗老师严谨的科研态度，孜孜不倦的工作精神是我学习的标杆。感谢孙老师对我实践的悉心指导。感谢胡玉、成小婷、张楠、姚妙兰、王姣、李静、檀晨曦、高锦芳师姐和刘文畅、李文清、陈家捷、王朝辉、吴盛凯、朱云昊师兄的在实验和生活上的指导和帮助。感谢樊利鹏、吴家强、陈伟、王世亨、侯志伟、柳泽锋、朱亦晨、曹宝鑫师弟和魏继红、于永霞、吴慧芳、陈晓庆、张南南师妹还有柯虹瑜学妹、田璐琦学妹对我实验的帮助。感谢我的同门马涛、程丽妹、庞云、聂扬帆、安玉、刘冰这三年来的陪伴和帮助。此外，还要感谢我的父母，他（她）们在精神上和物质上给予了我很大程度上的支持和鼓舞，使我能够顺利完成学业，感谢他（她）们！再次向所有关心和帮助我的老师、同学和家人表示我最衷心的感谢！35
