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1、中华人民共和国国家标准GB5009.255—2016食品安全国家标准食品中果聚糖的测定2016-08-31发布2016-09-20实施中华人民共和国发布国家卫生和计划生育委员会GB5009.255—2016食品安全国家标准食品中果聚糖的测定1范围本标准规定了食品中果聚糖含量的离子色谱法测定方法。本标准适用于乳及乳制品、婴幼儿配方食品、婴幼儿谷类辅助食品、固体饮料、配制酒中单独添加的低聚果糖、多聚果糖或菊粉含量的测定。2原理试样经热水浸提,样液中的蔗糖经蔗糖酶水解成葡萄糖和果糖,葡萄糖和果糖经硼氢化钠还
2、原成相应的糖醇,多余的硼氢化钠用乙酸中和。样液中的果聚糖经过果聚糖酶水解成果糖和葡萄糖,经离子色谱-脉冲安培检测器测定果糖含量,通过换算系数,折算得到果聚糖的含量。3试剂和材料3.1试剂除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1.1氢氧化钠(NaOH)。3.1.2马来酸(C4H4O4)。3.1.3蔗糖酶:来源于酵母,酶活力≥300U。3.1.4硼氢化钠(NaBH4)。3.1.5冰乙酸(CH3COOH)。3.1.6三水乙酸钠(CH3COONa·3H2O)。3.1.7
3、果聚糖酶:来源于黑曲霉,酶活力≥10000U。3.1.850%氢氧化钠溶液(NaOH):色谱纯。3.1.9无水乙酸钠(CH3COONa):纯度≥99.0%。3.1.10氮气(N2):纯度≥99.9%。3.2试剂配制3.2.1氢氧化钠溶液(1mol/L):称取40g氢氧化钠(精确至0.01g),溶于水并稀释至1000mL,室温下可放置2个月。3.2.2马来酸钠缓冲溶液(100mmol/L,pH6.5):称取1.16g马来酸(精确至0.01g)于150mL烧杯中,加入约70mL水溶解,用1mol/L氢氧化
4、钠溶液调节pH6.5,用水稀释至100mL。4℃保存,可放置3个月。3.2.3蔗糖酶溶液(4.5U/mL):将蔗糖酶(活力为300U)溶解于66mL马来酸钠缓冲溶液,分装到2mL的离心管中,-20℃保存,可放置6个月。使用前需测定酶活力。3.2.4氢氧化钠溶液(50mmol/L):称取2g氢氧化钠(精确至0.01g),溶于水并稀释至1000mL,室1GB5009.255—2016温下可放置2个月。3.2.5硼氢化钠溶液(10mg/mL):准确称取适量硼氢化钠(精确至0.001g)于聚丙烯离心管中,用5
5、0mmol/L氢氧化钠溶液溶解,最终质量浓度为10mg/mL,用时现配。3.2.6乙酸溶液(200mmol/L):吸取0.6mL冰乙酸,用水稀释至50mL,4℃保存,可放置2个月。3.2.7乙酸钠溶液(200mmol/L):称取1.36g三水乙酸钠(精确至0.01g),溶于水并稀释至50mL,4℃保存,可放置2个月。3.2.8乙酸钠缓冲溶液(pH4.5):吸取14mL乙酸溶液和11mL乙酸钠溶液混合,并用水稀释至50mL,用时现配。3.2.9果聚糖酶溶液(455U/mL):将果聚糖酶(活力为10000
6、U)溶解于22mL乙酸钠缓冲溶液,分装到2mL的离心管中,-20℃保存,可放置6个月。使用前需测定酶活力。3.2.10氢氧化钠溶液(200mmol/L):取10.4mL50%氢氧化钠溶液,用水稀释至1000mL,通入氮气保护,缓慢摇匀,室温下可放置7d。3.2.11氢氧化钠(150mmol/L)乙酸钠(500mmol/L)混合溶液:称取41g无水乙酸钠(精确至0.01g),用约500mL水溶解,0.22μm滤膜过滤,脱气10min,加入7.8mL50%氢氧化钠溶液,并用水稀释至1000mL,通入氮气保
7、护,缓慢摇匀,室温下可放置7d。3.3标准物质果糖标准物质(C6H12O6):纯度≥99.0%。3.4标准溶液的配制3.4.1果糖贮备溶液(2000mg/L):准确称取0.05g(精确至0.1mg)80℃烘干至恒重的果糖标准物质于50mL烧杯中,加入约10mL热水,待果糖溶解后,冷却至室温,用水稀释至25mL容量瓶中,摇匀,4℃保存,可放置1个月。3.4.2果糖中间溶液(80.0mg/L):吸取果糖贮备溶液1mL,用水稀释至25mL容量瓶中,用时现配。3.4.3果糖标准曲线工作溶液:取适量果糖中间溶液
8、,用水配制成质量浓度为0.800mg/L、1.60mg/L、4.00mg/L、8.00mg/L、16.0mg/L的标准曲线工作溶液。3.5材料3.5.1净化柱:反相固相萃取柱,填料为苯乙烯二乙烯基苯,2.5mL。3.5.2微孔滤膜:水相,0.22μm。4仪器和设备4.1离子色谱仪:配有三元及以上梯度泵,脉冲安培检测器,Au工作电极。4.2天平:感量为0.1mg、0.001g和0.01g。4.3pH计:精度为0.01pH。4.4旋涡振荡器。4.5恒温水浴摇
