GB4789.40-2010发布稿食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验发布稿.pdf

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.40—2010食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination：Enterobactersakazakii2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.40—2010前言本标准代替GB/T4789.40-2008《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验》。本标准与GB/T4789.40-2008相比，主要变化如下：—

2、—修改了标准的中英文名称；——删除了附录A中A.3。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准所代替的历次版本发布情况为：——GB/T4789.40-2008。IGB4789.40—2010食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验1范围本标准规定了食品中阪崎肠杆菌（Enterobactersakazakii）的检验方法。本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎肠杆菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1恒温培养箱：25℃±1℃，36℃

3、±1℃，44℃±0.5℃。2.2冰箱：2℃～5℃。2.3恒温水浴箱：44℃±0.5℃。2.4天平：感量0.1g。2.5均质器。2.6振荡器。2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。2.8无菌锥形瓶：容量100mL、200mL、2000mL。2.9无菌培养皿：直径90mm。2.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.11全自动微生物生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1缓冲蛋白胨水（bufferpeptonewater，BPW）：见附录A中A.1

4、。3.2改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素（modifiedlaurylsulfatetryptosebroth-vancomycinmedium，mLST-Vm）：见附录A中A.2。3.3阪崎肠杆菌显色培养基。3.4胰蛋白胨大豆琼脂（trypticasesoyagar，TSA）：见附录A中A.3。3.5生化鉴定试剂盒。3.6氧化酶试剂：见附录A中A.4。3.7L-赖氨酸脱羧酶培养基：见附录A中A.5。1GB4789.40—20103.8L-鸟氨酸脱羧酶培养基：见附录A中A.6。3.9L-精

5、氨酸双水解酶培养基：见附录A中A.7。3.10糖类发酵培养基：见附录A中A.8。3.11西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A中A.9。2GB4789.40—2010第一法阪崎肠杆菌的检验4检验程序阪崎肠杆菌检验程序见图1。检样100g（mL）+BPW稀释液900mL36℃±1℃，18h±2h1mL+mLST-Vm10mL44℃±0.5℃，24h±2h阪崎肠杆菌显色培养基36℃±1℃，24h±2h挑取疑似菌落TSA25℃±1℃，48h±4h挑取黄色菌落生化鉴定报告图1阪崎肠杆菌检验程序5操作步骤5.1前

6、增菌和增菌取检样100g（mL）加入已预热至44℃装有900mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤，44℃±0.5℃培养24h±2h。5.2分离5.2.1轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色3GB4789.40—2010培养基平板，36℃±1℃培养24h±2h。5.2.2挑取1个～5个可疑菌落，划线接种于TSA平板。25℃±1℃培养48h±4h。5.3鉴定自T

7、SA平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主要生化特征见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。表1阪崎肠杆菌的主要生化特征生化试验特征黄色素产生＋氧化酶－L-赖氨酸脱羧酶－L-鸟氨酸脱羧酶（＋）L-精氨酸双水解酶＋柠檬酸水解（＋）D-山梨醇（－）L-鼠李糖＋发酵D-蔗糖＋D-蜜二糖＋苦杏仁甙＋注：＋＞99%阳性；－＞99%阴性；（＋）90%－99%阳性；（－）90%－99%阴性。6结果与报告综合菌落形态和生化特征，报告每100g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌

8、。第二法阪崎肠杆菌的计数7操作步骤7.1样品的稀释7.1.1固体和半固体样品：无菌称取样品100g、10g、1g各三份，加入已预热至44℃分别盛有900mL、90mL、9mLBPW中，轻轻振摇使充分溶解，制成1:10样品匀液，置36℃±1℃培养18h±2h。分别移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤，44℃±0.5℃培养24h±2h。7.1.2液体样品：以无菌吸管分别取样品100mL、10mL、1mL各三份，加入已预热至44℃分别盛有900mL、90mL、9mLBPW中，轻轻振摇使充分混匀，