冷冻电镜简介

冷冻电镜简介

ID:67625137

大小:1.36 MB

页数:9页

时间:2021-09-15

冷冻电镜简介_第1页
冷冻电镜简介_第2页
冷冻电镜简介_第3页
冷冻电镜简介_第4页
冷冻电镜简介_第5页
冷冻电镜简介_第6页
冷冻电镜简介_第7页
冷冻电镜简介_第8页
冷冻电镜简介_第9页
资源描述:

《冷冻电镜简介》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库

1、.-1冷冻电镜开展背景人类基因组方案的完成,标志着科学已进入后基因组时代。虽然大量的基因序列得到说明,但是生物大分子如何从这些基因转录、翻译、加工、折叠、组装,形成有功能的构造单元,尚需进一步的研究。后基因组时代人类面临的一个挑战是解析基因产物—蛋白质的空间构造,建立构造基因组学,并在原子水平上解释核酸—蛋白,蛋白—蛋白之间的相互作用,从而说明由这些生物大分子和复合物所行使的生物学功能。在此过程中,构造生物学在其中扮演着重要角色。对生物大分子构造的解析,不仅具有深远的根底意义,而且具有广阔的应用前景。通过对核酸、蛋白质及其

2、复合物的构造解析,人们对它们的功能的理解更加透彻,就可以根据他们发挥功能的构造根底有针对性地进展药物设计,基因改造,疫苗研制开发,甚至人工构建蛋白质等工作,从而对制药、医疗、疾病防治、生物化工等诸多方面产生巨大的推动作用。日前用于解析生物大分子空间构造的主要手段是X射线晶体学技术和核滋共振波谱学。X射线晶体学可给出分子的高分辨结钩,核磁共振波谱学那么可测定分子在溶液中的准确构像,并可研究构像的动态变化。虽然X射线晶体学和核磁共振波谱学是解析生物大分子构造的强有力工具,但各有局限性。X射线晶体学解析的构造常常是分子的基态结钩

3、,而对解析分子的激发态和过渡态却往往无能为力:生物大分子在体常常发生相互作用并形成复合物而发挥功能,这些复合物的结晶化非常困难。核磁共振波谱学虽可获得分子在溶液中的构造并可研究构造的动态变化,但目前只能用于分子量较小的生物大分子〔<10000道尔顿〕,而对分子量大的生物大分子尤其是超分子复合物却无能为力。人类对生物体系的研究经历了由个体到器官,由器官到组织,由组织到细胞,由细胞到生物大分子这样一个层次由高到低的过程。随着科学的开展,人们对生物体系的研究又转向由低层次到高层次,由简单体系到复杂体系。在此过程中,细胞作为生命的

4、根本单位起着承上启下的重要作用。多少年来,科学家的一个梦想是能观察到生物大分子在细胞的行为,几十年来,人们对大量的生物大分子及其复合物应用电子显微镜进展研究,开展出了强有力的电子显微学来研究生物大分子构造的方法学。近年来,由于快速冷冻和低温冷却技术的引进,导致了冷冻电子显微学技术的诞生。冷冻电镜在研究生物大分子构造尤其是超分子体系的构造方面取得了突飞猛进的开展,在生物学领域的应用越来越受到重视,逐渐成为一种被普遍承受的公认的研究生物大分子尤其是超分子体系构造的有效研究手段,成为连接生物大分子和细胞的纽带和桥梁。.可修编..

5、-2冷冻电镜开展过程及分类2.1冷冻电镜开展过程冷冻电子显微镜技术〔cryo-electronmicroscopy〕是在20世纪70年代提出的,早在20世纪70年代科学家们就利用冷冻电镜研究病毒分子的构造,首次提出了冷冻电镜技术的原理、方法以及流程的概念。到了20世纪90年代,随着冷冻传输装置、场发射电子枪以及CDD成像装置的出现,冷冻电镜单颗粒技术出现。21世纪初,冷冻电镜技术进一步开展,利用三维重构技术获得了二十面体病毒的三维构造,但此时冷冻电镜的分辨率水平依然没有得到突破,这限制了冷冻电镜在生物大分子领域的应用,虽然

6、冷冻电镜和X射线晶体学、核磁共振被称作构造生物学研究的三大利器,但不得不成认冷冻电镜是三者当中最弱的一种技术手段,在现在已解析的一千多种膜蛋白构造当中,90%以上都采用的是X射线晶体学方法,核磁共振在小分子量的蛋白构造解析中也发挥了重要的作用,而冷冻电镜在蛋白构造解析当中所起的作用微乎其微。然而2021年12月5日,美国加州大学旧金山分校副教授程亦凡与同事DavidJulius两个实验室合作,采用单电子计数探测器,以近原子分辨率〔3.4埃〕,确定了在疼痛和热知觉中起中心作用的一种膜蛋白TRPV1的构造,这一振奋人心的成果让

7、研究人员们开场重新审视冷冻电镜在构造生物学研究中的所能发挥的作用。毕竟和X射线晶体学方法相比,它所需的样品量很少,也无需生成晶体,这对于一些难结晶的蛋白质的研究带来了新的希望。蛋白质TRPV1构造确实定标志着冷冻电镜正式跨入“原子分辨率〞时代。2.2冷冻电镜分类目前我们讨论的冷冻电镜根本上指的都是冷冻透射电子显微镜,但是如果我们以使用冷冻技术的角度定义冷冻电镜的话,冷冻电镜主要可以分为冷冻透射电子显微镜、冷冻扫描电子显微镜、冷冻蚀刻电子显微镜。2.2.1冷冻透射电子显微镜冷冻透射电镜〔Cryo-TEM〕通常是在普通透射电镜

8、上加装样品冷冻设备,将样品冷却到液氮温度〔77K〕,用于观测蛋白、生物切片等对温度敏感的样品。通过对样品的冷冻,可以降低电子束对样品的损伤,减小样品的形变,从而得到更加真实的样品形貌。一台冷冻透射电镜的价格在600万美元左右,价格极其昂贵,它的优点主要表达在以下几个方面:第一是加速电压高,电子能穿透厚样

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。