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时间:2018-01-24
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1、光电比色分析仪的基本知识概述:北京普朗公司的现有主要产品都是体外诊断医用设备(IVD产品),在《医疗器械分类目录》中该类产品的管理类别是6840-Ⅱ类。其注册工作由省级或直辖市药监局管理。是医院、卫生防疫站、血站、妇幼保健站等临床实验室及食品安全、动物检疫及科研实验室对样本进行检验的仪器。本公司现有主要产品属于光电比色分析仪器。仪器工作时检测到的原始信号是一个光信号,通过分析计算得到最终检验结果。因此光学系统的好坏对仪器的质量起着决定性的作用。下面首先介绍一下光电比色的基本知识。一.光电比色检验的基本知识光电比色检验是指利用物质具有吸收、发射或
2、散射光谱谱系的特点,对物质进行定性或定量的分析方法。它具有灵敏、快速、简便等特点,是生物化学分析中最常用的分析技术之一。1.1物质的溶液对光的选择性吸收现象物质的溶液为什么会有颜色,人看到的不同颜色,是不同波长的光对人眼睛产生的不同视觉效应。不同物质的溶液,只吸收与之对应的某个波长的光子能量,因此每种物质的溶液都有自己特定吸收光谱,即某种物质对某种波长的光有最大吸收(吸收峰),而对其他波长的光几乎不吸收或很少吸收,人看到的溶液颜色只是未被吸收的可见光。因为不同物质的溶液,只吸收不同波长的光,所以人眼会看到不同物质的溶液呈现出不同的颜色。互补光:
3、例如,紫(400~430)与绿(500~560);兰(430~450)与黄(560~590);青(480~500)与红(620~700),互为互补光。如果看到的溶液是兰色,则溶液吸收的一定是黄色光。紫外光:λ小于400nm红外光:λ大于760nm1.2比色原理:由于物质溶液颜色的深浅,是随溶液浓度的改变而改变,浓度越大,颜色越深。所以可以根据溶液颜色的深浅,来判定有色溶液浓度的大小。a)9目视比色:即将待测溶液与已知浓度水平的,相同物质的标准溶液进行颜色比较,根据标准液的已知浓度和颜色深浅,从而判定待测溶液中所含待测物质的多少,达到进行定性分析
4、和定量检验的目的。举例:目视比色法。b)光电比色法:显然目视比色法只能大概判定浓度,不能准确定量。为了解决准确定量的问题,科学家创建了光电比色检测法,用光电探测器代替人的眼睛,进行比色检验。c)不同物质的吸收光谱曲线:下图是用分光光度计测得的A、B、C三种物质的吸收光谱曲线,可以看到A物质在390nm处有一吸收峰,而C和B在此处无吸收,由于A物质在390处具有高的吸收,因此用390波长的光检测该物质时,会得到很高的灵敏度。d)工作波长:为了提高仪器检验的灵敏度,应该选择待测物质的吸收峰波长作为检验波长,这样只要待测溶液中含有被测物质,就会对入射
5、光产生明显的吸收(检测信号)。如果浓度变化,则会引起对入射光的吸收(检测信号)产生明显变化。因此在上图中选择560nm波长作为检测波长,就容易测得C物质浓度变化引起的吸光度变化值,并依此计算出浓度值。很显然如果需要检测A,B的浓度,则应分别选择390nm,470nm作为工作波长。如果待测容器中既有A物质,又有B物质(伴随物),在需要检测A物质时,却选择了410nm作为工作波长,则必定受到B物质的干扰(因此时测得的吸光度值是A和B的总和)。e)单色光:为了减少其它物质对检测的干扰,检测波长的光谱范围应该越窄越好(但光谱范围越窄,在同一光源的情况下
6、,获得的光能量会越小,信号会越弱)。在检验仪器中,一般利用干涉滤光片(一个滤光片只提供一种波长)或者光栅(可连续选出不同的波长)来获得高纯度的单色光。 (为什么要选择物质的吸收峰波长作为工作波长?)f)常用生化滤光片透射光谱曲线示例:常用标准生化滤光片的主要波长有:340,380,405,450,480,492,505,510,546,578,620,630,700nm等;中心波长误差为:±1-3nm,半波宽度在6~12nm左右,最高透过率30%~60%(可视需要而选定)。91.3.朗伯-比耳定律:如果不把吸光度和浓度建立起量的联系,仅有吸光
7、度则没有任何临床意义。朗伯-比耳定律的创立,解决了吸光度与浓度量的内在联系,该定律是光谱化学分析的理论基础。朗伯-比耳定律(光的吸收定律):在一定条件下,当入射光一定时,溶液对光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度成正比。表达式如下:A=K·C·L(1)其中:A—吸光度;K—吸光系数;C—溶液浓度;L—液层厚度(光在溶液中走过的路径)。C当液层厚度为1cm,浓度单位为1mol/L时,吸光系数K称为摩尔吸光系数,用ε表示。ε是物质的特征性常数。该定律的下列形式,为应用朗伯-比耳定律提供了方便:(2)I0It其中:Io:入射光信号强度;It:透射光信号
8、强度。仪器只要分别测得入射光信号和透射光信号,就可利用(2)式计算出待测液的吸光度。除了溶液的浓度和温度以外,影响朗伯-比耳定律正常应用的主要仪器因素
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