分子生物学实验复习题附答案

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1、分子生物学复习题实验一DNA的制备（1）为什么分子生物学实施时要担心EB？溴化乙锭（Ethidiumbromide）是DNA诱变剂，溴化乙锭可以嵌入碱基分子中，导致错配。具有高致癌性(接触致癌)（2）DNA加样缓冲液的用途是什么？由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。（3）DNA电泳时所用的琼脂糖凝胶其浓度是如何决定的？1．核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系（2）琼脂脂糖的浓度不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝

2、胶进行电泳分离。琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度/%0.30.60.70.91.21.52.0线状DNA大小/kb60-520-110-0.87-0.56-0.44-0.23-0.1（4）琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理是什么DNA分子在pH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向阳极移动。DNA分子在电场中通过琼脂糖凝胶而泳动，除了电荷效应以外，还有分子筛效应。由于DNA分子可片段的相对分子质量不同，移动速度也不同，所以可将相对分子质量不同或构象不同的DNA分离。DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比，因此

3、通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离时行比较，便可测出未知片段的大小。但是当DNA分子大小超过20kb时，普通琼脂糖凝胶就很难将它们分开。此时电泳的迁移率不再依赖于分子大小，因此，就用琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过此值。（5）琼脂糖凝胶电泳时胶中DNA是靠什么发出荧光的？为什么？溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,可插入DNA双螺旋结构的两个碱基之间，形成一种荧光络合物。在254nm波长紫外光照射下，呈现橙黄色的荧光。用溴化乙啶检测DNA，可检出10-9g以上的DNA含量。（6）制备基因组DNA

4、时用到的以下试剂分别起什么作用？CTAB等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来氯仿有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。无水乙醇上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于TE溶液中，即得植物总DNA溶液。75%乙醇,乙醇轻轻洗涤管壁实验二RNA的制备1.制备RNA时通常要注意些什么？为什么？应该要注意(1)不要徒手操作,必须带手套;(2)加样时不能够大声说话,防止唾液等进入;由于RNA

5、分子的结构特点，容易受RNA酶的攻击反应而降解，加上RNA酶极为稳定且广泛存在，因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染，并设法抑制其活性，这是本实验成败的关键。2.制备的RNA通常有哪些用途？制备的DNA通常又有哪些用途？研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。质粒DNA构建克隆载体,分离目的基因3.RNA制备好后是通过什么方法检测其有没有降解的？从胶上检测什么指标来判断RNA质量好坏？为什么？1.2%琼脂糖凝胶电泳。在紫外检测仪下观察，完整的总RNA样品应呈现三条带：28S、18S、和5SrRNA。

6、其中28SrRNA条带的亮度应该为18SrRNA条带的1.5~2倍。反之，说明部分28SrRNA已经降解成18SrRNA。若无清晰条带，则说明样品RNA已严重降解。若加样孔内或孔附近有荧光区带，则说明有DNA污染。4.RNA制备好后通过什么方法测定其含量？RNA通常用分光光度计测量，通常在A260的读书在0.15-1.0之间才是可靠的，A260为1相当于RNA的浓度为40微克/ml实验三质粒DNA的制备1.什么是质粒？质粒有什么主要用途？染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分子（cccDNA），能自

7、主复制并能稳定遗传的遗传因子。常常编码一些对宿主有利的酶的基因，这些基因的表型包括抗生素抗性、产生抗生素、限制酶、修饰酶等用途:把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术，送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。2.分子生物学实验中用的质粒是由野生型改建而来的，它必须具备哪三个基本要素？1环状DNA分子能够自我复制，或整合到染色体上，随染色体复制。2有多个限制酶切点(便于切割)3有标记基因(便于进行检验)3.制备的质粒DNA在琼脂糖凝胶上通常以三种形式条带存在，它

8、们分别是什么？哪种条带形式的质粒DNA其转化或转染效率最高？三种结构：线形、开环、闭环超螺旋。实验四感受态细菌的制备及质粒DNA的转化（1）什么是感受态细菌？感受态细菌的主要用途是什么？感受态细胞：处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源DNA分子通过时细胞的状态。感受态细菌吸收异源DNA分子，使