高效液相色谱操作指引

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1、洋紫荆油墨（中山）有限公司支持性文件文件编号：BVL-SOP-版本：A/0生效日期：2012.5.20文件名称Aglient1260高效液相操作指引修订状态：0页码：1/8一．目的规范Aglient1260高效液相色谱仪的操作及维护保养。二．范围适用于实验室相关人员的操作及人员培训。三.职责：检测员负责使用和维护保养，设备管理员负责管理及期间核查。四．操作步骤1.开机1)配制各流动相，放入各自溶剂瓶中，超声脱气20min。2)打开计算机，登陆windows操作系统。3)打开主机各模块电源(不分先后，1260会根据需要自动关闭紫外灯)

2、，不管用DAD检测器还是用FLD检测器，紫外检测器电源均需要打开以保持各模块通信。待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站。4)从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，正常情况会默认进入此界面。5)确保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。单击“确定”。（注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。6)旋开排气阀（逆时针，缓缓旋开约1/4即可），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵

3、编辑画面。将泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%，单击“确定”。右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内无气泡为止；依此切换到B、C、D溶剂同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）,查看柱前压力（若大于10bar，则应更换排气阀内过滤白头）。备注：本页修改时，在此处增加审批栏目。洋紫荆油墨（中山）有限公司支持性文件文件编号：BVL-SOP-版本：A/0生效日期：2012.5.20文件名称Aglient1260高效液相操作指引修订状态：0页码：2/8

4、1)将泵的流量设到所用方法的流量，如：1.5ml/min，调所用的方法，多元泵则根据方法设定溶剂配比；关闭排气阀（顺时针）。2)待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况。基线平稳后则可以进行样品的测试（一般20分钟左右基线则可达到平稳状态）。备注：本页修改时，在此处增加审批栏目。洋紫荆油墨（中山）有限公司支持性文件文件编号：BVL-SOP-版本：A/0生效日期：2011.4.1文件名称Aglient1260高效液相操作指引修订状态：0页码：3/82.数据采集方法编辑1)编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者

5、姓名，样品数据文件名等。2)编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项.选中项单击“确定”入下一画面“方法注释”，编辑好单击“确定”进入下一画面“选择进样源/位置”，选中Als单击“确定”入下一画面“设置方法”进行参数设定。3)四元泵参数设定：在“流速”处输入流量,如1mL/min,在“溶剂”处选中B输入80%(A=100-B-C-D)，在右面注释栏中标明各溶剂的名称；设置“停止时间”和“后运行时间”，在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如：250bar，以保护柱子，在“时间表”添加编辑梯度。4)进样器参数设定：

6、在进样模式中输入进样量xxul。“标准进针”——只能输入进样体积此方式无洗针功能。“针清洗后进样”——可以输入进样体积和洗瓶位置为xx，此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。5)进样器进样程序参数设定：选中使用进样程序，在“函数”中添加相应函数即可按程序进样。6)TCC检测器参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”——使柱温箱的温度左右一致。7)DAD检测器参数设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如

7、>0.1min(2s),再设置“停止时间”和“后运行时间”。FLD则需要设发射波长和激发波长，同时可以设定需要保存的光谱。备注：本页修改时，在此处增加审批栏目。洋紫荆油墨（中山）有限公司支持性文件文件编号：BVL-SOP-版本：A/0生效日期：2011.4.1文件名称Aglient1260高效液相操作指引修订状态：0页码：4/81)仪器曲线设置：默认即可。2)方法编辑完，在“方法”菜单中选则“方法另存为”为新建方法命名，单击“确定”。3.数据采集方法1)在“序列”菜单中选择“序列参数”，在弹出对话框中输入操作者名称，数据存储目录路径

8、中的子目录，子目录即为数据图谱存储的文件夹，请认真填写，输入后，鼠标点击其他处，会自动弹出“E:---不存在，要创建它吗？”单击“确定”，再选择“手动”或“前缀/计数器”。2)编辑序列表：在“序列”菜单中选择“序列表”，在表格中可进