茶多酚大孔树脂吸附分离性能的研究

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1、茶多酚大孔树脂吸附分离性能的研究1材料与仪器1.1材料：茶叶(有限公司)(经西北大学生命科学学院植物教研室鉴定);1.2试剂及药品：茶多酚对照品(批号：，中国药品生物制品检定所提供);大孔树脂LX-X由西安蓝晓科技开发有限公司提供。其它试剂均为分析纯。1.3仪器：岛津LC-20A型高效液相色谱系统：包括LC-20A型高压恒流泵、SPD-20A检测器和LCSolution工作站；UV-762紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);电热恒温水浴锅(H·H·S21-6C，上海医疗器械五厂);电子分析天平(FC204，上海精科实业有限公司);旋转蒸发器R502B(上海亚蓉生化仪

2、器厂);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵；索式提取器；电热鼓风干燥箱;植物粉碎机(FZ102，天津市泰斯特仪器有限公司)；层析柱(40mm×50cm)。2方法2.1茶多酚的定性、定量检测2.1.1茶多酚的薄层定性检测硅胶薄板制作按1：3的比例称取硅胶G和0.5%的CMC-NA，研磨约30min后，平铺到10×20cm的洗净烘干的玻璃平板上，铺匀，隔夜，自然晾干。展开剂配制按氯仿：乙酸乙酯：正丁醇：甲酸=2：1.3：0.4：0.3的比例配置（约需80ml）层析活化薄板：105℃，30min。点样：所用液体为留取的待测液，点样量为25uL。饱和：在层析缸内扣放入一培养皿，再将薄板放在

3、上面,板子不接触层析液，在其蒸汽中饱和30min以上。层析：将板子放入展开剂中展开，待展开剂前沿距板子上端1.5cm取出，放入通风厨晾干。结果观察及分析:（肉眼观察）2.1.2茶多酚的定量测定—酒石酸亚铁分光光度法1利用茶叶中的多酚类物质能与亚铁离子形成蓝色络合物的性质，将茶叶水提液及树脂法、有机溶剂法所得产品配制成一定浓度的溶液，使其与酒石酸亚铁溶液在一定的介质条件中反应生成蓝色络合物，通过测定络合物的吸光光度值，利用公式便可以算出茶叶及各产品中茶多分的含量。仪器及用具实验室常规仪器及感量0.0001的分析天平、分光光度计2.1.2.1试剂和溶液1）酒石酸亚铁溶液：准确称量0

4、.500克硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和2.500g酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O），用水溶解并定容至500ml。（溶液低温、避光保存，有效期一个月）2）PH=7.5的磷酸盐缓冲液1/15M磷酸氢二钠：称取11.6885g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），用水溶解并定溶至500ml。1/15M磷酸二氢钾：称取4.5390g磷酸二氢钾（KH2PO4·12H2O），用水溶解并定溶至500ml。取上述1/5磷酸氢二钠溶液85ml和1/15M磷酸二氢钾溶液15ml，混匀即可。2.1.2.2操作方法试样制备：称取3g茶叶，研碎后，将其放置于500ml的锥形瓶中，加沸

5、蒸馏水450ml，立即移入沸水浴中，浸提45min，浸提完毕后立即趁热减压过滤，滤液移入500ml容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2～3次，并将滤液移入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度。称取多酚产品各0.025g，用甲醇溶解并定容至25ml，溶液浓度为0.1%。测定步骤：a.吸取上述试样液各1ml，分别加入已标号的25ml容量瓶中，然后各加入4ml水，5ml酒石酸亚铁溶液，充分混匀后用PH=7.5磷酸盐缓冲液定溶至计刻度线。b.不加试样液，配制试剂空白溶液，以作参考。c.用10ml比色杯，在波长540nm处测定各溶液的吸光度A。测定结果如表1：2.1.2.3结果计算茶叶及

6、茶多酚产品中的茶多酚含量，以干物质量百分率表示：计算公式为：A×1.957×2×L1茶多酚（%）=───────────×1001000×L2×M×m其中：L1——试剂的总量（ml）L2——测定时用液量（ml）M——试样的质量(g)m——试样干物质含量百分率（%）A——试样的吸光度1.957——用10mm比色杯，当吸光度等于0.50时，每毫升茶汤中茶多酚相当于1.957mg。0.239×1.957×2×25茶多酚产品（%）=───────────×100%=93.54%1000×1×0.0252.1.2.4结果讨论2.1.3茶多酚的定量测定—酒石酸亚铁分光光度法21原理利用茶叶

7、中的多酚类物质能与亚铁离子形成蓝色络合物的性质，将茶叶水提液及三种提取法所得的产品配制成一定浓度的溶液，使其与酒石酸亚铁溶液在一定的介质条件中反应生成蓝色络合物。通过测定此络合物的吸光度值，利用由没食子酸乙醋作为对照品制作的标准曲线便可计算出茶叶及各产品中茶多酚的含量。根据茶多酚主要成份是表儿茶素和表没食子儿茶素类。儿茶素结构的羟基在苯核上的位置不同，既有邻苯二酚基，又有连苯三酚基，还有没食子酸形成酯型结合物。而酒石酸亚铁主要是与茶多酚中的邻位羟基和连位羟基功能团显色，而对间位羟基和单羟基不