液相色谱常见问题及处理方法

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时间:2018-01-21

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1、液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足,解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多。调整衰减即可。5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。7、检测池中有气泡。解决办法为排气。8、记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。9、流动相流量不合适。调整流速即可。10、检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰

2、到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。1、拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查;2、把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降,否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查;3、将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。这时,如果柱压仍不下降,再检查;4、更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,请与厂商联系。一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高

3、的问题,SGE提供的Rheodyne7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么?1、筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子。2、存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子,改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1、温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定2、流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1.流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定2、泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。

4、3、流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合HPLC仪器问题1、我的HPLC泵压明显的偏高,请问可能的原因?答:流速设定过高;流动相或进样中有机械杂质,造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞;流动相粘度过大;柱温过低;缓冲盐结晶;压力传感器故障。2、基线不稳,上下波动或漂移的原因是什么,如何解决?答:a.流动相有溶解气体;用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气  b.单向阀堵塞;取下单向阀,用超声波在纯水中超20分钟左右,去处堵塞物  c.泵密封损坏,造成压力波动;更换泵密封  d.系统存在漏液点;确定漏液位置并维修  f.柱后产生气泡;流通池出液口加负

5、压调整器  g.检测器没有设定在最大吸收波长处;将波长调整至最大吸收波长处  h.柱平衡慢,特别是流动相发生变化时;用中等强度的溶剂进行冲洗,更改流动相时,在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。3、接头处为何经常漏液,如何处理?答:接头没有拧紧;拧松后再紧,手紧接头以手劲为限,不要使用工具,不锈钢接头先用手拧紧,再用专用扳手紧1/4-1/2圈,注意接头中的管路一定要通到底,否则会留下死体积。接头被污染或磨损;建议更换接头。接头不匹配,建议使用同一品牌的配件。4、进样阀漏液是如何造成的?答:a.转子密封损坏;更换转子密封  b.定量环阻塞;清洗或更换定量环  c.进样

6、口密封松动;调整松紧度  d.进样针头尺寸不合适,一般是过短;使用恰当的进样针(注意针头形状)  e.废液管中产生虹吸;清空废液管谱图问题1、问:造成峰拖尾的原因是什么,如何消除?答:a.筛板阻塞;反冲色谱柱、更换进口筛板  b.色谱柱塌陷;填充色谱柱  c.有干扰物质的存在;使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱  e.流动相PH值不合适;调整PH值,对于碱性化合物,低PH值更有利于得到对称峰  f.样品与填料表面的溶化点发生反应;加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱2、问:造成峰分叉的原因是什么,如何消除?答:保护柱或分析柱污染;取下保护柱再进行分析。如果必要更换保

7、护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相;改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。3、问:K值增加时,拖尾更严重,这是为什么?答:反相模式,二级保留效应;  a.加入三乙胺(或碱性样品)  b.加入乙酸(或酸性样品)  c.加入盐或缓冲剂(或离子化样品)  d.更换一支柱子4、问:保留时间的波动有几种可能的原因?答:温控不当;调节好柱温。流

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