本科毕业论文（设计）

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1、本科毕业论文（设计）杨梅素和二氢杨梅素的高效分离纯化（大摘要）学院：＿生命科学学院＿专业：制药工程班级：＿2007级（1)班学号：070704110223学生姓名：樊静静指导教师：郁建平2011年6月1日杨梅素和二氢杨梅素的高效分离纯化大摘要本研究以藤茶（显齿蛇葡萄）为原料致力于易于工业化生产的二氢杨梅素、杨梅素的分离纯化条件研究。建立和优化了二氢杨梅素的结晶重结晶条件，获得了较高纯度的二氢杨梅素和杨梅素。在此基础上，建立了高效液相色谱法测定杨梅素、二氢杨梅素的操作条件和藤茶总黄酮的测定方法。藤茶是一

2、种非常古老的中草药资源、类茶植物资源和药食两用植物资源，其原植物为葡萄科蛇葡萄属的显齿蛇葡萄（Ampelopsisgrossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang）。其性凉，具利尿，消炎，清热解毒，散瘀破结,祛风除湿等功效，能医治肺痈、肠、瘰病、痈症肿痛、跌打、风湿、烫伤、肝炎、慢性肾炎、小便涩痛等疾病，并可治感冒、咽喉肿痛、胃热呕吐等症。藤茶主要成分为二氢杨梅素和杨梅素等黄酮成分。二氢杨梅素基本性质为白色针状结晶，mp:245～246℃,易溶于热水、热乙醇、丙酮、甲醇，微溶于水、醋酸

3、乙酯，难溶于氯仿、石油醚。显色反应为盐酸-镁粉反应呈玫瑰红色，三氯化铁反应呈紫黑色，与三氯化铝反应呈强黄绿色荧光；α-萘酚反应阴性；与锆盐-柠檬酸反应鲜黄色不褪。杨梅素基本性质为黄色结晶，mp：324～326℃，溶于甲醇、乙醇、热水，微溶于水，难溶于氯仿、丙酮、石油醚。显色反应为盐酸-镁粉反应呈玫瑰红色，与FeCl3乙醇液反应呈墨绿色，与AlCl3反应呈强黄绿色荧光，α-萘酚反应呈阴性，与NaOH反应呈黑绿色，UV(MeOH)：375.0nm，255.0nm。贵州藤茶黄酮含量可高达40%以上，藤茶黄酮

4、的主要成分为二氢杨梅素（Dihydromyricetin，DMY）和杨梅素（Myricetin,MYR），美国FDA已将杨梅素广泛应用于医药、食品、保健品和化妆品；而二氢杨梅素具有清除自由基、抗氧化、抗血栓、抗肿瘤、消炎等多种功效，广泛应用于治疗呼吸道感染、酒精中毒的中成药制剂并已在制备抗白血病及鼻咽癌药物的应用领域取得了发明专利；是保肝护肝，解酒醒酒的良品，主要作为医药原料药并做为一类新药准备进入临床试验。研究了藤茶总黄酮的测定方法，以二氢杨梅素为对照品，在291nm测定吸收度，获得标准曲线的线性回

5、归方程为：y=0.0441x+0.034，相关系数：R2=0.9992，建立了藤茶总黄酮的测定方法，用该法测定藤茶总黄酮含量，比用芦丁作标样测定结果更准确和符合实际，测定6月初采自贵州梵净山的藤茶中总黄酮成分含量达43%。杨梅素和二氢杨梅素在结构上仅存在2,3位双键的差异，现有文献中还没有采用常规溶剂法同时将二者纯化出来的报道。本实验经过多个方案综合，结合二者极性以及对丙酮溶解度的差异，先采用水煎煮法提取总黄酮，即称取干燥的藤茶茎叶100g，粉碎后加热煎煮提取两次，滤液放置在0-4℃环境下静置过夜，待

6、析出黄色沉淀后，用乙醇溶解，去杂精制。然后减压回收乙醇，干燥黄色块状物，得粗黄酮。接着用丙酮作为提取溶剂回流提取总黄酮，得到二氢杨梅素的丙酮提取液，回收丙酮，黄色浓稠物用水进行重结晶，经多次重结晶后可得具有细针状的高纯度二氢杨梅素，并且在重结晶加热过滤操作中，在滤纸上存有大量黄绿色物质，将其收集干燥后保存。丙酮提取后的不溶性残渣采用乙醇-水（1:1）进行回流提取，将提取液进行浓缩，静置数日可得黄褐色沉淀。经提取分离后得到三个分离纯化产物，分别将其在甲苯-乙酸乙酯-甲酸10:8:5)和甲苯-乙酸乙酯-甲

7、酸（6:10:1)的展开剂中进行展开，与杨梅素和二氢杨梅素标准品斑点和Rf值比较，白色针晶所呈斑点与二氢杨梅素对照品斑点一致，同样对1%FeCl3乙醇液显紫黑色，在甲苯-乙酸乙酯-甲酸（10:8:5）展开剂中，二氢杨梅素对照品Rf值为0.37，白色针晶Rf值为0.38，在甲苯-乙酸乙酯-甲酸（6:10:1）展开剂中，二氢杨梅素对照品Rf值为0.59，白色针晶Rf值为0.57，白色针晶在两种不同比例的展开剂中所呈斑点单一；黄绿色物质，黄褐色沉淀和杨梅素对照品所呈斑点一致，遇1%FeCl3乙醇液显墨绿色，

8、慢慢变为棕黑色，尽管斑点所显颜色与二氢杨梅素所显颜色有所相似，但对比之下，仍可区分。在不同比例的甲苯-乙酸乙酯-甲酸展开剂中，黄绿色物质所呈斑点单一，黄褐色沉淀中除有与杨梅素对照品相同高度斑点外，还有一个低于杨梅素对照品高度的斑点，且该斑点对1%FeCl3乙醇液显紫黑色，高度与二氢杨梅素对照品高度一致。在甲苯-乙酸乙酯-甲酸（10:8:5)展开剂中，杨梅素对照品Rf值0.54，黄绿色物质Rf值为0.54，黄褐色沉淀Rf值为0.55和0.40，在甲苯-乙酸