GB 4789.39-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 粪大肠菌群计数

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.39—2013食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数2013-11-29发布2014-06-01实施GB4789.39—2013前言本标准代替GB/T4789.39-2008《食品卫生微生物学检验粪大肠菌群计数》。本标准与GB/T4789.39-2008相比，主要修改如下：——修改了标准的中文名称；——修改了操作步骤；——增加了附录B。IGB4789.39—2013食品安全国家标准食品微生物学检验粪大肠菌群计数1范围本标准规定了食品中粪大肠菌群计数的方法。本标准适用于各类食品中粪大肠菌群的计数。2术语和定义2.1粪大肠菌群一群在44.5℃

2、培养24h～48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群来自人和温血动物粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。3技术要求设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)恒温培养箱：36℃±1℃;b)冰箱：2℃～5℃;c)恒温水浴箱：44.5℃±0.2℃;d)天平：感量0.1g;e)均质器;f)振荡器;g)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头;h)无菌锥形瓶：容量500mL;i)无菌培养皿：直径90mm;j)pH计或pH比色管或精密pH试纸。4培养基

3、及试剂4.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤：见附录A中A.1。4.2EC肉汤（E.coliBroth）：见附录A中A.2。4.3无菌生理盐水：见附录A中A.3。4.41mol/LNaOH：见附录A中A.4。4.51mol/LHCl：见附录A中A.5。5检验程序粪大肠菌群检验程序见图1。1GB4789.39—2013检样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤36℃±1℃48h±2h不产气产气EC肉汤44.5℃±0.2℃24h±2h不产气产气粪大肠菌群阴性管粪大肠菌群阳性管查MPN表报告

4、结果图1粪大肠菌群MPN计数法检验程序6操作步骤6.1样品的稀释6.1.1固体和半固体样品：称取25g样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液，或置225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍打式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取样品25mL置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。6.1.3样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时分别用1mol/LN

5、aOH或1mol/LHCl调节。6.1.4用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入盛有9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。6.1.5根据对样品污染状况的估计，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。6.2初发酵试验2GB4789.39—2013每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂

6、基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h。记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为粪大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。如采用多个稀释度，最终确定最适的三个连续稀释度方法参见附录B。6.3复发酵试验用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于预先升温至44.5℃的EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管放入带盖的44.5℃±0.2℃恒温水浴箱内，培养24h±2h，水浴箱的水面应高于肉汤培养基液

7、面，记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性。定期以已知为44.5℃产气阳性的大肠杆菌和44.5℃不产气的产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳性和阴性对照。6.4粪大肠菌群MPN计数的报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表（见附录C），报告每g(mL)粪大肠菌群的MPN值。3GB4789.39—2013附录A培养基和试剂A.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤A.