gbt 28092-2011 落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法

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1、ICS65．020．0B16囝圄中华人民共和国国家标准GB／T28092--2011落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofBofryosp矗口eriolaricina(K．Sawada)Y．Z．Shong2011-12-30发布2012—06—01实施丰瞀粥鬻瓣警麟瞥星发布中国国家标准化管理委员会促19刚昌GB／T28092--2011本标准按照GB／T1．12009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和

2、国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：吴翠萍、李彬、粟寒、高渊、陆军、吴晶、刘伟、高振兴、安榆林。1范围落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法GB／T28092--2011本标准规定了落叶松枯梢病菌Botryosphaerialaricina(K．Sawada)Y．z．Shong1987的检测和鉴定方法。本标准适用于对落叶松苗木、接穗以及带小枝梢的原木等样品携带落叶松枯梢病菌的检测和鉴定。2落叶松枯梢病菌基本信息中文名：落叶松枯梢病菌。学名：Botryosphaerialaricina(K．Sawada)Y．Z．Shong1987。异名：Physalosporala

3、ricinaK．Sawada，Guignardialaricina(K．Sawada)W．Yamamoto&K．Ito。病害英文名：shootblightoflarch，twigdiebackoflarch。采用Ainsworth(1973)真菌分类系统，病原菌为子囊菌亚门Ascomycotina，腔菌纲Loculoascomy—cetes，格孢腔菌目Pleosporales，葡萄座腔菌科Botryosphaeriaceae，葡萄座腔菌属Botryosphaeria。无性阶段为半知菌亚门Deuteromycotlna，腔孢纲Coelomycetes，球壳孢目

4、sphaeropsidales，球壳孢科sphaeropsidaceae，大茎点霉属Macrophoma。落叶松枯梢病菌的其他信息参见附录A。3方法原理根据病原菌危害的症状特点(参见附录B)采集样品进行检测，观察病原菌产生的子实体的显微形态特征，并结合病原菌的地理分布和寄主范围等有关信息进行结果判断。4仪器和用具4，1仪器体视显微镜、普通光学显微镜(具显微拍摄和测量功能)、光照培养箱、高压灭菌器、干热灭菌器、冰箱等。4．2用具手持放大镜、试剂瓶、纱布、脱脂棉、镊子、剪刀、培养皿、修枝剪、吸管、酒精灯、打孔器(直径5ram)、瓷盘、解剖刀、酒精灯、解剖针、载玻

5、片、盖玻片、微量移液器、标本盒、海绵、胶带、标签等。5试剂石蜡，70％、95％酒精，二氧化硅干燥剂。GB／T28092--20116检测6．1样品采集根据下列症状等进行样品采集：苗木、接穗上的新梢枯死，并且枯死的梢端呈弯曲状；在病组织上有固着的白色滴状物树脂块；干枯的枝干部为紫褐色或灰褐色；在枯死的枝干、松针上有突出的枯梢病原菌子实体。原木上如果带有的小枝梢，则应仔细观察小枝梢上有无子实体，若无，则可排除怀疑带有枯梢病原菌。6．2样品制备6．2．1子实体的制片用解剖针挑取样品上的子实体少许，置于载玻片上加盖玻片压碎或由发病部位直接切片制成水玻片，在解剖镜或显

6、微镜下观察子实体的形态并确认是否成熟。如果成熟，则观察典型形态特征并测量大小；如果不成熟则需进一步培养。6．2．2不成熟子实体的培养对子实体不成熟的部位，先用无菌水浸泡2d～3d，然后浸泡在35℃和10℃的无菌水中进行交替变温处理，每次5rain，重复1次，再浸在无菌水中30rain，最后取出置室温条件下保湿培养中7d--12d，诱导产生成熟子实体并制片镜检。7鉴定7．1有性阶段子实体形态特征子囊座为壳状、瓶状或梨形，黑褐色，单生、2个～5个群生或丛生在病枝表皮下，成熟后仅孔口外露，大小为(170“m～500pm)×(130pm～300pm)。子囊棍棒状，双

7、壁，无色，顶端圆，下有短柄，平行排列于子囊腔基部，大小为(115pm～149pm)×(20pm～45pm)。假侧丝很多，线形，无色，半永久存在，直径3pm。子囊孢子8个，双行排列，椭圆形至纺锤形，单胞，无色，大小为(22．5pm～40pm)×(6．3pm～15．5”m)。参见附录c。7．2无性阶段子实体形态特征分生孢子器群生于顶梢残留的叶背和顶梢小枝周围的表皮下，并使表皮突起，近球形或扁球形，黑色，大小为(120／Lrn～249Urn)X(148pm～213um)。分生孢子梗短，不分枝，圆柱形，(5pm～7um)×(2．5pm～3．2pm)。分生孢子椭圆形至

8、纺锤形，单胞，无色，大小为(24／lm～30po)×