gbt 28083-2011 栎枯萎病菌检疫鉴定方法

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1、ICS65．020．01B16雷圄中华人民共和国国家标准GB／T28083--2011栎枯萎病菌检疫鉴定方法DetectionandidentificationofCeratocystisfagacearum(Bretz)Hunt2011-12-30发布2012-06-01实施宰瞀髁紫瓣訾糌瞥翼发布中国国家标准化管理委员会及111刖青本标准按照GB／T1．1—2009给出的规则起草。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC271)提出并归口。本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：严进、吴品珊、陈克、黄英、陈岩、段胜男、常雪艳。GB／T28

2、083--20111范围栎枯萎病菌检疫鉴定方法GB／T28083--2011本标准规定了栎枯萎病菌的检疫鉴定方法，包括对栎属(QuercusL．)和栎枯萎病菌其他寄主的原木、木制品、木质包装和苗木的检疫。本标准适用于对来自栎枯萎病发生国家和地区的所有栎属植物和栎枯萎病菌其他寄主的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版(包括所有的修改单)适用于本文件。SN／T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3栎枯萎病菌基本信息壳斗长喙壳ECeratocystis丘gacear

3、um(Bretz)Hunt]属真菌界(Fungi)，子囊茵门(Ascomycota)，核菌纲(Pyrenomycetes)，球壳目(Sphaeriales)，长喙壳科(Ophiostomataceae)，长喙壳属(CeratocystisE11．&Halst．)。栎枯萎病菌其他信息参见附录A。4方法原理栎枯萎病菌的寄主范围、传播途径、植株症状(参见图B4)和病原形态(参见图R1、图B．2、图＆3)是栎枯萎病菌检疫鉴定方法的依据。5试剂与标准菌株5．1试剂葡萄糖(C。H。0。·H。O)、甲(苯)丙氨酸、磷酸二氢钾(KH。PO。)、硫酸镁(MgSO；·7HzO)、硫酸铁[

4、Fe：(sot)3·zH：O含量(以Fe计)21．o～23．o％]、硫酸锰(MnSOt)、硫酸锌(ZnSOt·7HzO)、维生素H(VitaminH)、琼脂粉。以上试剂除特殊注明外，均为化学纯。5．2标准菌株”Ceratocystisfagacearum(Bretz)HuntA1和A2标准菌株。1)来自美国的Ceratocystis扫gacearum(Bretz)HuntA1和A2标准菌株保存于中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所。1GB／T28083--20”6主要仪器设备6．1仪器设备立体显微镜、生物显微镜(具油镜和测微尺)、电子分析天平(感量0．001g)、普

5、通天平(感量0．1g)、超净工作台、生物培养箱、高压灭菌器。6．2试验用具斧子、锯子、手持放大镜、培养皿、三角瓶(500mL)、试管(直径12ram)、烧杯(1000mL)、手术刀、手术剪、镊子、载玻片、盖玻片、量筒、吸管、酒精灯。7检疫与鉴定7．1现场检疫7．1．1样品抽取按照SN／T2122规定的方法。7．1．2现场检疫将抽取的原木或木制品或苗木用斧子或锯子分别横向和纵向切开，仔细观察横断面和纵断面有无黑褐色条纹。如带皮，则要检查树皮和木质部之间是否有垫状菌丝层和边材上是否有传病媒介(参见附录C)。将有症状样品带回实验室作进一步检验。7．2室内检测与鉴定7．2．1

6、分离培养采用麦芽浸出液酵母培养基或NFP培养基<见甜录D)，用于病原菌的分离、培葬形状测定和菌种保存。在可疑发病的褐色条纹处取一块组织，切成4mm×4mm的小片，用0．5％NaOCl表面消毒5rain，无菌水冲洗3遍，放在直径9cm的平板培养基上，每皿放4片～6片，于24℃培养箱内培养，黑暗和光照各i2h交替。7d后用显微镜检查。若发现昆虫，首先需进行形态鉴定(参见附录c)，如为露尾甲，则应检查是否携带栎枯萎病菌，方法是将其肢解，组织片用上述方法分离培养。7．2．2形态观察观察并记录培养基上生长茵落的形态特征。从菌落中挑取少量培养物，以水作浮载剂，制成玻片，在显微镜下

7、观察。如为Ceratocystis血gacearum的无性阶段，即可观察到分生孢子梗和分生孢子。详细记载分生孢子和菌丝的形态，记录并测量分生孢子梗、分生孢子大小。用直径4mm的打孔器取菌落边缘的萤块2块，分剐放在2个NFP培养基平板的一侧；用同法分别取标准菌株CeratocystisfagacearumA1和A2交配型的菌块各l块，分别放在上述平板培养基的另一侧，于24℃下培养7d～10d。用立体显微镜观察同一平板培养基上的两菌落交界处是否产生子囊GB／T28083--2011壳。挑取两菌落交界处产生的子囊壳制成玻片，于显微镜下观察。如与A1交配型菌