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1、MM_FS_CNG_O31品栀子黄高效液相色谱法薄层色谱法MM_FS_CNG_0314食品中栀子黄的测定1.适用范围本方法适用于饮料、酒、糕点中栀子黄的测定。第一法.高效液相色谱法2.原理概要样品中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。3.主要试剂和仪器.主要试剂甲醇；石油醚：60〜90C；乙酸乙酯；三氯甲烷；姜黄色素；栀子甙；栀子甙标准溶液：称取栀子甙标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀，即得卩g/mL栀子甙；栀子甙标准使用
2、液：分别吸取栀子甙标准溶液0,,,,于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL即得0,,,,卩g/mL的栀子甙标准系列溶液。.仪器小型粉碎机；恒温水浴；高效液相色谱系统：Water'sm501泵，U6K进样器，岛津RF-535;荧光检测器，Bluechip/PC计算机和Baseline810色谱控制程序。4.过程简述.样品处理饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜卩m过滤，滤液备作HPLC分析用。酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。糕点：称取10g样品放入100m
3、L的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min,置室温。砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣5次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取3〜5次，每次30mL直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。.测定HPLC参考条件色谱柱：粒度5卩mODSc150mnrK流动相：甲醇：水（35:65）流速：/min波长：240nm标准曲线在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液0,2,4,6,8卩L,进行HPLC分析，然后以峰高对栀子甙浓度
4、作标准曲线。样品测定在实验条件下，注入5卩L“”项下的样品处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得样品中栀子甙含量。1.结果计算.计算按式（1）计算x=AXVnnx1000(1)式中：X样品中栀子黄色素的含量，g/kg;A—进样液中栀子甙的含量，卩g;V——样品制备液体积，mL；m——样品质量，g。.本标准的检测限、回收率、精密度。本方法栀子甙的检测限为卩g/mL,栀子黄色素浓度在〜/kg范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为％,92%,%。相对标准差（）％：,,。第二法.薄层色谱法2.原理概要样品
5、中栀子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254nm丁下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。3.主要试剂和仪器.主要试剂甲醇；乙醇；乙酸乙酯；丙酮；甲酸；三氯甲烷；硅胶GF254薄层色谱用；展开剂：乙酸乙酯：丙酮：甲醇：水（5:5：1：1）；展开剂：三氯甲烷：甲醇（6:3）。.仪器全玻璃浓缩器；薄层板涂布器；玻璃板，4cnX20cm,20cmX20cm层析缸；UV254nm荧光灯；微量注射器。4.过程简述.样品处理：将酒、饮料、蛋糕样品处理后，进行TLC检识
6、。见.展开结果。酒：取样品100mL减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL萃取3〜5次，至无栀子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。约剩20mL为止，此液留作薄层分析用。饮料：取样品100mL用乙酸乙酯萃取，每次50mL萃取3〜5次，至无栀子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩20mL此液留作薄层分析用。蛋糕：称取已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品（用手摸已干燥即可），加入50mL石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理三次，以除去脂肪，吹干
7、后研细，放入索式提取器，用甲醇提取色素，直到无栀子黄色素为止，直至色素全部提完，置水浴浓缩至约5mL此液留作薄层层析用。.测定点样：取市售硅胶GF254荧光板，离板底边2cm处点样品提取液卩L,板的右边点2卩L栀子黄色素标准溶液。展开：将点样项已点好样和标准板，用，展开剂展开，待栀子黄色素明显分开后取出，晾干，与标准斑点比较，栀子黄Rf值为和。而姜黄色素为和。样品与标品的斑点的Rf值一致，则证明样品中的色素为栀子黄色素。1.来源：GB／T17335—1998
