MMFSCNJ出口食品平板菌落计数.docx

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1、MM_FS_CNJ_03出口食品平板菌落计数MM_FS_CNJ_0333出口食品平板菌落计数1.适用范围本方法适用于各种出口食品及其原料，有专门规定检验方法的除外。2.主要试剂和仪器.主要试剂（包括培养基）平板计数琼脂；75％乙醇；稀释剂：磷酸盐缓冲稀释液。.仪器工作台：超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台。琼脂平板在工作台上暴露15min,每平板不得超过15个菌落；恒温培养箱：36±「C；恒温水浴箱：45土1C；均质器；振荡器；吸管：1、10和25mL具刻度；平皿：直径为90mm；稀释瓶：广口瓶或三角烧瓶，容量为200mL和500mL

2、玻璃珠：直径为5mm左右；天平：感量。3.过程简述.样品制备以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，则用75％乙醇在包装开口处擦拭后取样。制备样品匀液.固体或半固体食品：以无菌操作取25g样品，放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1〜2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。.干燥或干粉食品以无菌操作取25g样品，放入装在225mL稀释剂和适量玻璃珠的500mL稀释瓶中，迅速振摇，将样品混匀，制成1:10的样品匀液。振摇时，幅度为30cm，7s内振摇25次，也可用机械振

3、荡器振荡15s代替手摇。.液体食品：用灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mL稀释剂的500mL稀释瓶中，按•条中所述方法迅速振摇，制成1:10的样品匀液。吸取样品时，吸管插入液面下不要超过。吸管内液体要在2〜4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。.稀释样品匀液用10mL灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10mL放入装有90mL稀释剂的200mL稀释瓶中。按条中所述的方法，迅速振摇。制成1:100的样品液。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中，吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度，然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁

4、将液体调至所要求的刻度。分别用10mL灭菌吸管按条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液，如10_3、10_4、10_5……。.平板接种对于每一个样品，选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。分别用灭菌吸管吸取1mL样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3min,应按条所述方法再振摇该样品液。分别加12〜15mL平板计数琼脂（已放45土「C的水浴中恒温）到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜和旋转。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平

5、板计数琼脂倾入加有1mL稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基，每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。.培养待琼脂凝固后将平皿翻转，立即放进36±1C的恒温培养箱内培养48土2h。培养箱应保持一定的湿度，经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15%。.菌落计数和记录培养后，立即计数每个平板上的菌落数。25〜250个菌落为合适范围。如果不能立即计数，应将平板存放于0〜4C,但不得超过24h。如只有一个稀释度在合适范围内，先计算每个稀释度两个平板的平均值，再计算两个稀释度的平均值，然后计算每克（毫

6、升）样品中平板菌落数（下表，样品1）。如有二个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内，先计算两个平板的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（毫升）样品中平板菌落数（下表，样品2）。当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时，计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数，计算两个平板上的平均菌落数，将平均菌落数乘以稀释倍数，得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号（*），表明该数系从菌落数在25〜250这一范围之外的平板估计所得（下表，样品3）。当所有平板上的菌落都超过250时，则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数，得到估计的平板菌落数。给这个

7、数注上星号（*）（意义同）（下表，样品4）。如果所有稀释度的平板都没有菌落，则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号（*）（意义同条）（下表，样品5）。同一稀释度的两个平板中，一个有25〜250个菌落，另一个的菌落多于250个，两个平板都要计数。计算方法同条（下表，样品6）。两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25〜250个范围内，而另一个的菌落数高于250或低于25，四个平板都要计数。计算方法参照条和条（下表，样品7）。某稀释度的两个平板都有25〜250个菌落，而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在25〜250

8、范围内。四个平板都要计数，计算方法参照条和条（下表，样品8、9）。蔓延生长菌落通常有三种不同类