微生物检验学之分枝杆菌属及检验.doc

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1、.....................最新资料整理推荐.....................分枝杆菌属及检验　　分枝杆菌属是一类细长或略带弯曲、为数众多（包括54个种）呈分支状生长的需氧杆菌。因其繁殖时呈分支状生长故称分枝杆菌。本属细菌的主要特点是细胞壁含有大量脂类，可占其干重的60%，这与其染色性、抵抗力、致病性等密切相关。耐受酸和抗乙醇，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗3%盐酸乙醇的脱色作用，故又称抗酸杆菌。需氧生长，无鞭毛，无芽胞和荚膜。引起的疾病均为慢性，有肉芽肿病变的炎症特点。　　分枝杆菌的种类较多，包括结核

2、分枝杆菌、非典型分枝杆菌和麻风分枝杆菌。非典型分枝杆菌是一大群分枝杆菌的总称，与人类有关的非典型分枝杆菌主要有堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、戈分枝杆菌、鸟分枝杆菌、蟾分枝杆菌、龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌和耻垢分枝杆菌等。本属细菌无内外毒素，其致病性与菌体某些成分如索状因子、蜡质D及分枝菌酸有关。 　　根据国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）的方案将本属细菌分为三类，即缓慢生长菌、迅速生长菌和不能培养菌。　　一、结核分枝杆菌 　　在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。 　　（一）生物学特性 　　1.形态与染色结核分枝杆菌为细

3、长或略带弯曲的杆菌。在培养基中可呈球状或丝状，陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。抗酸染色时因菌体含有大量脂类而不易着色，无论是否经碘液处理，着色后均不易被盐酸乙醇脱色，所以使菌体呈红色。本菌无芽胞、无鞭毛，近年发现有荚膜。6.....................最新资料整理推荐.....................　　2.培养特性本菌专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%～10%CO2环境中可刺激其生长。烛缸不适合本菌培养，需用二氧化碳培养箱。培养温度适应范围较大，35～40℃均可生长，最适温度为35～37℃。最适pH为6.5～6

4、.8。兼性胞内寄生菌，在细胞内外均可发育繁殖，强毒株可长期生存于巨噬细胞内。生长时还需适当的湿度。本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18小时一代。 　　在固体培养基上，一般需2～6周才能长出菌落。菌落呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状，形似菜花。在液体培养基中生长较快，多为表面生长，形成菌膜，且干燥易碎而沉于管底。此种特性与菌体的疏水性有关。若在液体培养基中加入乳化剂聚山梨酯-80，则呈均匀分散生长。有毒力菌株在液体培养基中可呈索状生长，无毒株则无此现象。 　　结核分枝杆菌营养要求较高，必须在血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的

5、特殊培养基上才能生长。但经多次传代或长期保存的菌种，也能在营养较简单的培养基中生长。　　3.生化反应各型结核杆菌均不发酵糖类，能产生过氧化氢酶，耐热触酶试验、聚山梨酯-80水解试验和耐热磷酸酶试验均为阴性，脲酶试验和中性红试验均为阳性。人型结核分枝杆菌烟酸试验、硝酸盐还原和烟酰胺酶试验均为阳性，借此可与牛型结核分枝杆菌鉴别。　　（二）临床意义 　　1.致病性结核分枝杆菌主要通过呼吸道、消化道和受损伤的皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引起的肺结核最多见。6.....................最新资料整理推荐....

6、.................肺部感染可分为原发性感染和继发性感染。肺外感染可发生在脑、肾、肠及腹膜等处。该菌不产生内毒素和外毒素和侵袭性酶。可在细胞内、外生长与大量繁殖，致病物质主要是荚膜、脂质、蛋白质。机体对菌体成分和其代谢产物引起免疫损伤以及变态反应，从而导致一系列组织学上的病理变化。　　2.Koch现象结核的特异性免疫是通过结核分枝杆菌感染后所产生，试验证明，将有毒结核分枝杆菌纯培养物初次接种于健康豚鼠，不产生速发型过敏反应，而经10～14天，局部逐渐形成肿块，继而坏死，溃疡，直至动物死亡。若在8～12周之前给动物接种减毒或小量结核分

7、枝杆菌，第二次接种时则局部反应提前，于2～3天内发生红肿硬结，后有溃疡但很快趋于痊愈。此现象为Koch在1891年观察到的，故称为Koch现象。 　　3.结核菌素试验利用Ⅳ型变态反应的原理，检测机体是否感染过结核杆菌。　　（三）微生物检验 　　1.标本采集根据感染部位的不同，可采集不同标本。结核患者各感染部位的标本中大多都混有其他细菌，为此应采取能抑制污染菌的方法。若作分离培养，必须使用灭菌容器，患者应停药1～2天后再采集标本。可采集痰、尿、粪便、胃液、胸水、腹水、脑脊液、关节液、脓液等。　　2.检验方法 　　（1）涂片检查 　　直接涂片包括：

8、　　1）薄涂片：挑取痰或其他处理过的标本约0.01ml，涂抹于载玻片上，用萋-尼氏染色（热染法）或Kinyoun（冷染法）抗酸染色，镜检