最新变性蛋白的复性和基因工程药物的质量控制概要教学讲义ppt.ppt

《最新变性蛋白的复性和基因工程药物的质量控制概要教学讲义ppt.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、进入夏天，少不了一个热字当头，电扇空调陆续登场，每逢此时，总会想起那一把蒲扇。蒲扇，是记忆中的农村，夏季经常用的一件物品。　　记忆中的故乡，每逢进入夏天，集市上最常见的便是蒲扇、凉席，不论男女老少，个个手持一把，忽闪忽闪个不停，嘴里叨叨着“怎么这么热”，于是三五成群，聚在大树下，或站着，或随即坐在石头上，手持那把扇子，边唠嗑边乘凉。孩子们却在周围跑跑跳跳，热得满头大汗，不时听到“强子，别跑了，快来我给你扇扇”。孩子们才不听这一套，跑个没完，直到累气喘吁吁，这才一跑一踮地围过了，这时母亲总是，好似生气

2、的样子，边扇边训，“你看热的，跑什么？”此时这把蒲扇，是那么凉快，那么的温馨幸福，有母亲的味道！　　蒲扇是中国传统工艺品，在我国已有三千年多年的历史。取材于棕榈树，制作简单，方便携带，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常会在上面作画。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇诸名，实即今日的蒲扇，江浙称之为芭蕉扇。六七十年代，人们最常用的就是这种，似圆非圆，轻巧又便宜的蒲扇。　　蒲扇流传至今，我的记忆中，它跨越了半个世纪，也走过了我们的半个人生的轨迹，携带着特有的念想，一年年，一天天，流向长长的时间隧道，袅变性蛋白的复性

3、和基因工程药物的质量控制概要一、蛋白质变性由于外界因素的作用，使天然蛋白质分子的构象发生了异常变化，从而导致生物活性的丧失以及物理、化学性质的异常变化，这种现象称为蛋白质的变性(denaturation)。变性可以涉及次级键、二硫键的断裂但不涉及一级结构上肽键的断裂二、蛋白质复性的意义→目标蛋白质没有生物活性(包涵体)→分离回收包涵体，→溶解包涵体(目标蛋白质恢复应有的天然构象和活性)1、稀释、透析复性法蛋白质复性的最大问题，是在复性过程中形成中间体和多聚体，中间体阻碍作用大的使蛋白质正确折叠困难，

4、复性就困难；阻碍小或无阻碍的容易复性。降低蛋白浓度可以减少中间体形成提高复性率。所以，在复性前用使用稀释、透析、过滤及凝胶过滤除去变性剂、还原剂，降低蛋白浓度。2、含有二硫键的蛋白的复性复性时涉及正确二硫键（分子内或者分子间）的重建。①空气氧化法②加入氧化剂-还原转换试剂③加入氧化型谷胱甘肽④使用还原剂保护巯基⑤加入二硫苏糖醇。3、封闭蛋白的疏水簇促进复性对蛋白质结构和序列的分析，确定出在蛋白中可能引起分子间相互作用的疏水簇，破坏这种疏水簇的突变，可能会减少聚集。用特异性结合疏水簇的单克隆抗体来封闭

5、疏水簇，减少分子间结合引起的聚集。4、凝胶过滤层析复性层析介质的隔离作用，降低了蛋白之间相互作用产生的聚集，使复性浓度、复性率得到很大的提高。5、小分子添加剂促进复性6、分子伴侣或折叠酶促进的复性7、人工分子伴侣促进的复性色谱法复性过程的示意图基因工程药物的质量控制一、基因工程药物与一般药物的对比1、基因工程药物是利用活细胞作为表达系统，产物的分子量较大，并有复杂的结构。2、许多基因工程药物是参与人体一些生理功能精密调节所必需的蛋白质。3、宿主细胞中表达的外源基因，在转录或翻译、工艺放大等过程中，都

6、有可能发生变化。二、基因工程药物的质控要点原材料的控制生产的控制最终产品的质量控制产品的保存（一）生物材料的质量控制⒈表达载体和宿主细胞明确目的基因的来源、克隆经过，表达载体的构建、结构和遗传特性⒉克隆基因的序列提供插入基因和表达载体两端控制区的核苷酸序列。所有与表达有关的序列应详细叙述⒊表达详细叙述生产过程中，启动和控制克隆基因在宿主细胞中的表达所采用的方法及表达水平（二）生产的控制1、培养过程的质量控制a、原始细胞库应详细记述种子材料的来源、方式、保存及预计使用寿命。应提供在保存和复苏条件下宿主

7、载体表达系统的稳定性证据。采用新的种子批时，应重新做全面检定。b、有限代次的生产提供培养生产浓度与产量恒定性、培养和诱导基因产物的数据，依据宿主细胞-载体系统的稳定特性，确定最高允许传种代数和细胞倍增数。c、连续培养生产应提供长期培养后表达基因的分子完整性资料，以及宿主细胞的表型和基因型特征。2、纯化过程的质量控制产品要有足够的生理和生物学试验数据，确证提纯物分子批间保持一致性；外源蛋白质、DNA与热源质控制在规定限度以下。在精制过程中能清除宿主细胞蛋白质、核酸、糖类、病毒、培养基成分及精制工序本身

8、引入的化学物质，并有检测方法。（三）目标产品的质量控制基因工程药物的质量控制主要包括以下几项要求：产品的鉴别、纯度、活性、安全性、稳定性和一致性。1.理化性质鉴定肽图分析：根据蛋白质、多肽的分子量大小以及氨基酸的组成特点，使用专一性较强的蛋白水解酶作用于特殊的肽链位点将多肽裂解成小片段，通过一定的分离检测手段形成特征性指纹图谱。常用方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳、高效液相色谱和毛细管电泳氨基酸成分分析：应包括甲硫氨酸、半胱氨酸及色氨酸的准确值。部分氨基酸序列分析：氨基端15