最新1组织学技术简介课件幻灯片.ppt

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1、1组织学技术简介课件组织的概念形态相似、功能相近的细胞与细胞间质结合在一起，形成组织。动物体四类基本组织：上皮组织结缔组织肌肉组织神经组织问题解决方法提高分辨率显微镜保持组织的原始构造化学固定透光切片、涂片、铺片、磨片增加反差染色区别不同生化成分组织化学、放射自显影、原位杂交观察生活状态培养①取材和固定②脱水和包埋③切片和染色④封片普通组织切片制作过程组织结构的立体形态与断面形态材料块适宜大小（0.5cm3）应用各种方法使组织标本尽量保持其离体前状态的过程称为固定。固定的目的和机制：①使蛋白质凝固，终止或减少分解酶的作用，防止自溶，保存组织、细胞的离体前结构状态，包括保存组织或细胞的抗原性，使

2、抗原不失活，不发生弥散。②保存组织、细胞内的蛋白质、脂肪、糖原、某些维生素及病理性蓄积物，维持病变的特异性特征。③使上述物质转为不溶解状态，防止和尽量减少制片过程中人为的溶解和丢失。④起助染作用。固定（fixation）１．物理学方法　如低温冷冻，干冰（dryice，即固态无水碳酸）冰冻真空脱水，石蜡渗入法。２．化学方法　采用各种化学溶液作固定液，使组织细胞进入固定状态。固定方法固定时间小标本（如胃粘膜等）2～4h，大标本应置放12～24h。常用固定液１．10％甲醛．２．中性甲醛液　甲醛（浓）：120ml，水：880ml，NaH2PO4·H2O：4g，Na2HPO4：13g。３．AF液95％乙

3、醇：90ml，甲醛(浓)：10ml。脱水：普通固定液大多是水溶液，必须先脱去组织内的水分，为浸蜡创造条件。脱水剂通常使用酒精。脱水的步骤是逐步升高酒精溶液的浓度，以去净组织块内的水分，最后完全由纯酒精取代。10％甲醛液固定后的组织块，脱水时应依次经过70％、80％、90％、95％酒精和无水酒精。透明：因石蜡不溶于酒精而溶于二甲苯，因而组织块经脱水后须再用二甲苯置换出酒精。组织块浸入二甲苯后逐渐变得透明，故此步骤称为透明。透明时间根据组织块的大小及性质而定。浸蜡：温箱（58～60℃）内熔化的石蜡，将透明好的组织块置入，放置适当时间，使石蜡浸入组织并替换出二甲苯。包埋：在包埋器的内壁涂一层甘油，倾

4、入熔化的石蜡，将浸透蜡的组织块放入包埋器，摆好间距和方位，俟蜡液表面凝固后，将包埋器投入冷水浴中，使石蜡冷却凝固。包埋后的组织蜡块，经过修整即可用于切片。普通轮转式切片机冰冻切片机切片：在切片机上将包有组织的蜡块切成5-6微米的薄片。取下一段蜡带，置于涂布一层蛋白甘油的载玻片上，滴上适量水，于酒精灯上徐徐加温，至蜡片在水面展平，分离每张蜡片，倾去水，摆好蜡片位置，放入烤片箱。俟蜡片干燥并牢固地附着于载玻片后，即可取出，进行染色。染色染色的目的是使组织内的不同结构染上不同颜色以便于在显微镜下观察。染色步骤（苏木精-伊红染色法为例）：注：脱蜡后，若组织是用含汞的固定液（如Susa液、Helly液）

5、固定，切片还须经含碘的70％酒精脱汞后再入70％酒精及蒸馏水。普通染色法即苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosinstaining，HE染色法）：苏木精为碱性染料，使染色质和核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，使胞质和细胞外基质着红色嗜酸性（acidophilia)；嗜碱性(basophilia)HE染色，垂体远侧部镀银染色：硝酸银→神经细胞(黑)镀银染色，示小脑皮质神经元醛复红与偶氮焰红染色，示肥大细胞和弹性纤维醛复红与偶氮焰红染色染色步骤（HE染色法为例）：注：脱蜡后，若组织是用含汞的固定液（如Susa液、Helly液）固定，切片还须经含碘的70％酒精脱汞后复水。封固从二甲苯中取

6、出切片，在切片的组织上滴加适量树胶，上面再加一盖玻片，使树胶布满于盖玻片与载玻片之间的间隙，封固即告完成。将封好的切片标本放入烤箱，待盖玻片粘着牢固后，即获得可供长期观察和保存的染色标本。应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物学的原理和技术，与组织学技术结合而产生，在组织切片显示某种物质的存在和分布状态。分类：一般组织化学术免疫组织化学术原位杂交术２.组织化学术（histochemistry）一般组织化学术基本原理是在切片上加某种试剂，和组织中的待检物质发生化学反应，其最终产物或为有色沉淀物，以用光镜观察，或为重金属沉淀，以用电镜观察。一般组织化学术糖过碘酸多醛席夫试剂PAS反应小肠上皮杯

7、状细胞的粘原颗粒紫红色反应产物例１　糖类：PAS（过碘酸希夫）反应，显示多糖和糖蛋白，呈紫红色例２　酶类：酶与特异性底物的反应产物、再与捕捉剂反应，形成有色的沉淀物联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。过氧化物酶染色例３　苏丹黑B(sudanblackB,SB)是一种能溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细