体内实验研究的常见问题及解答.doc

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1、个人收集整理勿做商业用途体内实验研究的常见问题及解答问：进行体内研究前需要注意什么？答：为体内研究设计的实验需要考虑：动物模型的选择、给药途径、剂量以及重复给药的频率。选择siRNA的用量和浓度时应该考虑以下因素：靶器官的特性和研究物的大小。问：进行小鼠的体内研究需要多少量的siRNA？答:siRNA体内研究领域相对较新，很少有已经确定的实验程序，因而很难确切地说实验需要多少量的siRNA.我们推荐您通过文献检索参考其他类似的体内研究需要的siRNA的量.小鼠全身给药需要100uL浓度为10－500uM的siRNA。有研究表明在大剂量给药时，一些毒性在20mg/kg/day(416mM）以

2、上才能观测到。问：锐博合成的siRNA能用于体内研究吗？答：我们已经对合成的siRNA进行处理，使其能应用于动物研究。问：在体内研究中,最好的给药途径是什么？答：寡核苷酸可以通过大剂量给药或使用ALZET微小泵持续给药。大剂量给药时要慎重，因为已有研究表明：一些毒性与寡核苷酸反义链的浓度有关，快速给药时可能会导致动物下肢瘫痪或致死，所以给药时要注意观察。很多已发表的论文实验是通过尾静脉给药的。任何给药方式都需要优化,以确保最佳的导入方式和动物的健康。剂量/浓度计算的常见问题及解答问：定量RNA的公式是什么？答：研究者可以用Beer法则定量RNA：吸光度（260nm）=（摩尔消光系数）＊(浓

3、度)*(路径长度，cm)。为了便于理解，等式变为：浓度＝（吸光度，260nm）/［（摩尔消光系数)*(路径长度，cm)]。当使用一个标准的10mm比色皿时,在公式中路径长度这个变量等于1。问：我需要浓度为20uM的样品,如何计算重悬siRNA缓冲液的量？答:锐博为您提供的siRNA是nmol数量级的冻干粉。样品浓度的计算如下：（siRNA的量，nmol）/(重悬体积，uL）＝样品浓度，umol/L。在解答前应先统一单位，确保单位可以抵消.例如：您购买了20nmol的siRNA,想溶解为50uM的样品。可按以下方法计算重悬缓冲液体积:a。等式：(20nmol）/?uL=50umol/L;b.

4、解答未知量:？uL=（20nmol)（1L/50umol)；c。单位换算:？uL=（20nmol）(1L/50umol）（1umol/1，000nmol）(1,000,000uL/1L）；d。答案：?uL=400uL。因此，应该使用400uL缓冲液去重悬20nmol的siRNA,溶解后为50uM的样品.问：6uL浓度为10uM的siRNA溶解液中含有多少ug的siRNA？答：首先计算含有多少nmol的siRNA：a。等式:?nmol=（6uL)(10umol/L)；b.单位换算:？nmol=(6uL）（10umol/L）（1L/1,000，000uL）（1，000nmol/umol)；c.

5、答案:?nmol=0。06nmol。然后利用siRNA的平均分子量(13，300g/mol）把nmol变为ug：a。等式：？ug=(0。06nmol）(13,300g/mol）；b。单位换算：?ug=(0.06nmol）(13,300g/mol）(1mol/1,000，000,000nmol）(1,000,000ug/g）;c。答案:?ug=0。798≈0.8ug.所以6uL浓度为10uM的siRNA溶解液中含有0。8ug的siRNA.问：siRNA的贮存浓度和工作浓度有何区别？答：siRNA的贮存浓度就是保存的最佳浓度,锐博推荐的贮存液浓度为20μM；而siRNA的工作浓度就是使siRN

6、A能够达到最佳沉默效果的转染浓度，一般10～100nM范围内，锐博生物推荐的转染浓度是50nM。共有4条记录共有1页当前第1页〈〈首页<<上一页下一页>>尾页〉>跳转到处理与保存方法的常见问题及解答问：你们提供的siRNA是怎样装运的?如果在常温下放置了一个星期，还有效吗？答:锐博为您提供的siRNA是冻干粉包装的，在常温下运输。这些冻干的样品在室温下能稳定保存2－4个星期,所以放置一个星期不会影响其沉默效果。但我们建议您收到样品后最好保存于-20℃或—70℃有霜冷冻箱中。个人收集整理勿做商业用途问：在脱保护实验中,是否需要将样品加热到90℃？答:在进行RNA寡核苷酸单链的脱保护实验时,通

7、常在90℃下加热样品几分钟就能保证在分子生物学水平改变潜在的二级结构。我们推荐您在55-60℃下加热样品5分钟更有利于二级结构的改变。在90℃下加热也能达到同样的效果，但超过一定时间核苷酸链就可能被降解。问：重悬后是否需要退火？答:重悬后在一般情况下不需要退火。如果需要，我们推荐您在55—60℃下加热样品5分钟,然后脉冲离心，在室温下静置30分钟冷却即可。问：siRNA样品应该如何保存？答：无论是以冻干粉保存还是重悬于无