最新免疫学检测中的干扰因素教学讲义PPT.ppt

《最新免疫学检测中的干扰因素教学讲义PPT.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、免疫学检测中的干扰因素随着基础免疫学研究的深入和现代免疫学理论的建立，使大量免疫学检测技术被不断地创新、发明；在临床疾病诊治的应用中也不断地推陈出新。目前应用免疫学原理检测的检验项目占到三级综合医院检验科全部检验项目的1／4，医疗收入约占1／3。这就要求检验人员不断掌握最新的临床免疫学知识和各种新的检验方法，了解检验项目的基本原理。生化临检要保证实验结果的正确性和可靠性，必须对实验整个过程中各个环节中的干扰因素有比较清楚的掌握和了解。在本次课中主要讨论的是标本本身内在因素、以及由于人为因素对标本处理不当等引起的外在因素、对免疫检测结果造成的影响。在了解这

2、些因素的同时，如何在临床工作中注意和解决这些干扰，以保证结果的准确性。标本自身及前处理所造成的干扰因素－类风湿因子（RF）－嗜异性抗体－自身抗体－补体－纤维蛋白－溶血或黄疸－交叉反应物质－外源性物质免疫学检测-干扰因素干扰因素和对策-类风湿因子患者体内存在的类风湿因子能显著干扰许多免疫学检测方法，IgM、IgG型RF可以与免疫检测系统中的捕获抗体及标记二抗的Fc段直接结合，从而导致检测结果假阳性或假性升高。RF对不同检测系统的干扰程度有所差异，影响程度并不与RF的浓度成正比。目前，在临床工作中使用的免疫检测试剂盒大部分均没有很好地防止RF干扰的措施，国外

3、著名公司要好于国内公司。干扰因素和对策-类风湿因子收集10份RF31～＞1000IU/L的患者血清，在美国和欧洲66各临床实验室进行74个项目的免疫竞争法或免疫夹心法检测，仪器和试剂均配套。3445个结果中8.7％为假阳性。错误高值结果中的21％（所有结果的1.8％）引起了临床的错误诊断，在使用RF吸附剂后再检测，错误结果得到纠正。39％的假阳性结果也可在使用RF吸附剂后降低。ClinicalChemistry2002;48(11):2008~2016RF的干扰－对策捕获抗体用F(ab`)2替代完整的IgG标本用连有热变性（63℃，10min）IgG的固

4、相吸附剂（Euroimmune公司）处理（将热变性IgG加入到标本稀释液或血清中同样有效），4℃过夜离心后在检测；检测抗原时，可以用终浓度0.1mol/L2-巯基乙醇(2-ME)等加入到标本稀释液或标本中，使RF（IgM型）降解。干扰因素和对策-嗜异性抗体嗜异性抗体通常是指与其他种类动物的免疫球蛋白产生反应的人类抗体，具有广泛的种特异性。免疫检测系统中大量使用单克隆抗体，嗜异性抗体可与啮齿类动物IgG的Fc段结合。这样嗜异性抗体既可与检测系统中的捕获抗体结合、又可和标记抗体结合，造成检测结果假阳性或假性升高。嗜异性抗体干扰的程度、频率与患者的疾病状态、年

5、龄、性别等无关。干扰因素和对策-嗜异性抗体将11261份血清标本使用荧光时间分辨免疫分析系统（PE公司，二步法、双位点）检测CEA，将缓冲液中加入小牛IgG约210个病人、3.3~4.7%的标本出现假性升高；加入15mg/L热处理小鼠IgG（MAK33）（Roche）可将干扰降为0.86%；同浓度天然小鼠IgG无效；去除捕获抗体或标记抗体的Fc段也可将干扰降至0.1%。ClinicalChemistry2002；48(4):613~621处理方法病人数频率（％）1切除捕获抗体Fc段和加入热处理15mg/LMAK33后结果正常1483.02仅切除捕获抗体F

6、c段后结果正常410.823切除捕获抗体Fc段或加入15mg/L天然MAK33或15mg/L热处理MAK33后结果正常40.084仅加入15mg/L热处理MAK33后结果正常30.06表1.不同处理方法对嗜异性抗体干扰的排除干扰因素和对策-嗜异性抗体使用Access免疫化学发光检测系统测定TSH、PSA、βHCG和皮质醇，前三项为双位点非竞争法，后为竞争法。160份标本测定HCG有5份（3.1%)假性升高；53份标本（37.9%)用嗜异性抗体吸附剂吸收后结果出现差异性下降；有4份标本的结果出现＞4SD的显著增高，使临床对结果的解释出现改变。ClinChe

7、m2003；49(7):1163～1169嗜异性抗体的干扰－对策在标本稀释液或待检标本中加入过量的动物Ig(s)，但加入量不足或亚型不同时无效（要与捕获抗体和标记抗体的Ig亚型相同）。捕获抗体使用F(ab`)2，切除Fc段。干扰因素和对策-自身抗体嗜靶抗原的自身抗体，如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，能与靶抗原结合形成复合物，在免疫检测系统中均可对靶抗原的测定结果造成负性干扰。判断嗜靶抗原的自身抗体对检测的负干扰，因紧密结合患者的疾病诊断、病史、其他实验检查的结果综合分析。如甲亢、甲低、I型糖尿病等。Erikssion等人采用针对cTnI中

8、心稳定区域抗原位点的捕获和检测抗体，开发了新的cTnI检测方法，有利于具有cTn