好氧反硝化菌的分离纯化及特性研究论文

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1、好氧反硝化菌的分离纯化及特性研究毕业论文目录1．SOD的发现和分类52．SOD的分布和定位63.材料与方法73.1　材料与试剂73.2　仪器83.3　方法83.4　SOD的鉴定93.5　超氧化物歧化酶(SOD)活力测定93.6　蛋白质含量测定94　结果94.1　沉淀法分离SOD94.1.1　热变性温度对提取SOD的影响94.2　硫酸铵分级沉淀法浓缩SOD104.3　综合法提纯SOD114.4　电泳鉴定SOD125　讨论125.1　实验误差125.2　单一方法与综合法的比较135.3　在实际中的应用13致谢15参考文献:1613朗读显

2、示对应的拉丁字符的拼音朗读显示对应的拉丁字符的拼音1．SOD的发现和分类自1956年解析肌红蛋白及血红蛋白晶体结构以来，至今已阐明了上百个蛋白质晶体的结构和几个t-RNA结构。蛋白质晶体学已作为一门边缘学科而确立，随着科学技术的发展和实验技术的不断完善，科学工作者通过各种手段能够获得生物大分子的基本结构信息，并可进一步获得有关作用机理调节原理的有力的信息，为设计各种生物实验提供坚实的基础。自从Mann和Keilin于1938年首次从牛红血球中分离出一种蓝色铜蛋白（最初定名为血铜蛋白）并由McCord和Fridocivh于1969年根

3、据其酶活特性定名为超氧化物歧化酶以来人们对它的研究不断深入近年来的研究表明在维持生物体内的产生与消除的动态平衡中起重要作用，它能防御氧毒性，增强机体抗辐射损伤能力，还可预防衰老、在一些疾病如肿瘤、炎症及自身免疫疾病等的治疗中有良好的疗效。目前国内对的研究主要集中在应用及与应用直接相关的基础理论的研究上。SOD已进入化妆品、食品、医药等领域，无可置的应用与开发将有不可估量疑的前景按其结合的金属离子，可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种，前两种性质相似在蛋白质一级结构空间结构、分子量、光谱性质及对不同抑制剂的敏感等方面

4、与后者差别较大。早些时候认为Fe-SOD主要存在原核细胞中，随实验手段的改进，现已在枸杞、何首乌等越来越多的维管植物中发现Fe-SOD的存在[9]。Mn-SOD在原核细胞和真核细胞中都存在，CuZn-SOD主要存在于真核细胞中，由此引出进化方面的研究一般认为Fe型Mn型SOD很早起源于一个共同的祖先——光合细菌而CuZn-SOD是在以后的发展中单独进化而成[10]。2．SOD的分布和定位SOD是生物体防御氧毒性的关键性防线13人们最初认为只SOD存在于好氧生物和耐氧生物中，而专性厌氧生物中不存在。1973年Bell发现在厌氧菌硫酸还

5、原菌中有SOD的活力，以后SOD活力在多种厌氧菌中被发现，只是活力较低，不易检测。专性厌氧菌SOD可以在细菌偶尔暴露于低浓度氧环境中时抵抗氧毒性，比如专性厌氧菌从一个无氧环境到另一个低氧环境过程中就需要这种保护。真菌里一般含Mn-SOD和CuZn-SOD。大多数真核藻类在其叶绿体基质中存在Fe-SOD，类囊体膜上结合着Mn-SOD这与原核蓝细菌相似，这些研究结果都支持藻类叶绿体起源于蓝细菌内共生的假说。大多数藻类不含CuZn-SOD。蓝藻中极大螺旋藻钝顶螺旋藻和盐泽螺旋藻中含Fe-SOD绿藻中不含CuZn-SOD而含Fe-SOD和M

6、n-SOD轮藻中含Fe-SOD、Mn-SOD和CuZn-SOD三种类型提示轮藻可能是绿藻向高等植物进化的过渡形式。植物细胞中的Fe-SOD主要存在于叶绿体中[9]罗广华等用大豆下胚轴为材料证明SOD活性主要存在于细胞质中,约占细胞内SOD的87.3%,其次分布于线粒体中,这部分约占实验又表明细胞质的SOD以CuZn-SOD为主,占胞质SOD的86%线粒体SOD主要是Mn-SOD占线粒体全部SOD的74%~76%。王爱国、罗广华等将线粒体分离为外膜、内膜、基质膜间溶质4个部分，进一步证明大豆下胚轴线粒体内SODD主要在基质（80%~9

7、7%）且验证为Mn-SOD其次分布在膜间溶质（16%~17%），且验证为CuZn-SOD。线粒体的内膜，一侧为基,质另一侧为膜间溶质，内膜呼吸链上产生的O2-能迅速被两侧SOD清除可见植物线粒体在正常情况下对自身O2-的防卫能力已经相当完善[10]。大多数原始的无脊椎动物细胞中都存在CuZn-SOD,这表明在动物进化早期就有这类SOD。脊椎动物一般含CuZn-SOD和Mn-SOD人、鼠、猪、牛等红细胞和肝细胞中含CuZn-SOD,而从人和动物肝细胞中也纯化了Mn-SOD。CuZn-SOD主要存在于细胞质也存在于线粒体内外膜之间，Mn

8、-SOD一般存在于线粒体基质中。SOD是细胞内酶，但在人血清中分离到一种独特的细胞外CuZn-SOD,不同于一般的SOD，这种SOD已在多种动物细胞里发现。从进化上来说是真核生物酶，但在某些细,D)%/菌如与鱼类共生的发光杆菌中含有C