微生物实验室质量管理

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1、微生物检验设施及设备保证实验无菌环境的设施：洁净室、无菌隔离系统、净化工作台保证实验用品无菌的设备：高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱适合微生物生长和保存的温控设备：培养箱、冰箱实验操作用仪器：全封闭薄膜过滤器、电动磁力搅拌器、恒温水浴箱、离心机、显微镜及玻璃仪器洁净室及隔离系统洁净室：是指对尘埃粒子及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域，其建筑结构、装备及使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。隔离系统：一套能够创造并维持一个符合药典试验要求的无菌环境的装置。洁净区的确认运行确认：洁净室内设有紫外灯洁净区的建材、构造等是否符合GMP要求高效过滤器的完

2、好性是否保持相对正压或负压检查人流、物流的气流的方向及压差的测定结果是否正常洁净区的确认性能确认：检查洁净室在静态下的环境质量是否符合要求（悬浮粒子、沉降菌、浮游菌）用擦拭法或接触法监测室内表面微生物监测洁净室温度、湿度和压差洁净区的日常监控悬浮粒子：指悬浮在空气中的尺寸在0.001um至1000um之间的固体、液体或两者的混合物，包括生物性粒子和非生物性粒子。洁净区的日常监控沉降菌：通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养基皿中的菌落数判定洁净环境内活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

3、洁净区的日常监控浮游菌：采用计数浓度法，通过收集悬浮在空气中的生物粒子于专门的培养基，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数，以此来评定洁净室的洁净度。洁净区的日常监控表面微生物：棉签擦拭法用湿润的棉签擦拭一定面积的表面，将棉签浸于生理盐水中，超声波洗涤一定时间后，吸取一定体积的洗涤液于内置琼脂培养基的平皿中，在30～35℃培养48小时，观察菌落数，计算一定面积的表面微生物数。表面皿直接接触法注有培养基的培养皿，当培养皿内的培养基直接接触被测表面一定时间后，表面微生物吸附在培养基上，在一定的温度下培养一定时

4、间后计数即得。中国GMP洁净度标准洁净级别尘粒最大允许数/立方米微生物最大允许数≥0.5um≥5um浮游菌/立方米沉降菌/皿100级3，50005110，000级350，0002，0001003100，000级3500，00020，00050010300，000级10，500，00060，0001，00015欧洲GMP洁净级别尘粒最大允许数/立方米微生物最大允许数≥0.5um≥5umCFU/m3CFU/4hA3，5000〈1〈1B3，5000105C350，0002，00010050D3500，00020，000200100取样点、取样量洁净区空气悬浮粒子、浮游菌及沉

5、降菌的最少取样点数面积m2洁净级别10010，000100，000〈102～322≥10～〈20422≥20～〈40822≥40～〈1001642≥100～〈20040103≥200～〈40080206≥400～〈10001604013取样点的位置悬浮粒子、沉降菌、浮游菌的取样点的位置离地面0.8-1.5m左右。送风口测点位置离开送风面30cm左右。可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点取样点的位置表面微生物取样点的位置洁净室在其墙面(4面)各取一点，共4个样品。地面根据测定现场选取4点，共4个样品。如果该室有设备，则在设备表面取2点，共2个样品。人员卫生监测：手套

6、、工作服易遭污染的部位、硅套，有时包括头罩和口罩。取样面积每点控制在24－30cm2。洁净区的更衣洁净服的消毒用双层丝绸布包待消毒无菌衣后，塞进用真丝布做的袋中，用带抽紧袋口扎牢。在袋外再包扎一层丝绸布后，放入消毒柜内。用高压蒸汽121℃消毒30分钟。将消毒后的无菌衣包取出，放到更衣室内，去掉最外层包布，将无菌服袋挂于二更室备用。无菌服超过24小时不用，应重新消毒。洁净区的更衣进入无菌室时无菌衣的穿戴程序用肥皂洗手，脱鞋，进更衣前室脱掉普通工作服挂在衣钩上。手在消毒液中浸泡15秒，进入二更室，解开包无菌衣的袋口脱去里层包衣布，拿出无菌衣服。先穿上衣后戴上无菌口罩再穿上

7、连鞋裤子，并将上衣下摆扎入裤子内，同时检查无菌衣的帽子是否将头发等包实，是否穿戴整齐，同时检查无菌衣质量，如遇破损或未清洁干净，则需更换无菌衣，然后经缓冲室进入无菌操作室。洁净区的更衣离开无菌室脱衣程序同无菌衣的穿戴程序相反。如果洁净服已弄脏，应经清洗干燥后，否则叠好衣服按上述包扎后放于待灭菌处。手消毒用的消毒剂应每月轮换使用，以防产生耐药菌珠。洁净区的管理无菌室应按微生物测定室洁净区环境监测现行规程要求定期进行尘埃粒子、浮游菌、沉降菌和表面微生物检测，做好原始记录。每次实验时对无菌室进行温湿度和压差的记录，室内温度控制18～26℃，相对湿度45%～