种质资源保存.ppt

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1、项目十三植物种质资源的保存1.掌握种质资源长期保存与中短期保存的方法。2.掌握超低温保存的基本流程。3.能够根据离体材料的特点，离体保存种质材料。教学目标种质是亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。植物种质资源即为携带各种不同遗传物质的植物总称，又称遗传资源或品种资源，包括栽培，野生及人工创造的各种植物的品种或品系。种质资源保存是指在天然或人工创造的适宜环境条件下，贮存植物种质，使其保持生命力与遗传性的技术。项目介绍原地保存异地保存原地保存主要通过建立自然保护区、天然公园来实现种质保存的目的；异地保存则通过建立植物园、种质资源圃、种子库以及离体保存等方法来

2、实现。种质保存的方式:可使一些无性繁殖作物种质资源低温长期保存，避免资源的丢失。节省土地和劳力，方法简单，花费少并能在保存中脱毒。一旦利用可快速繁殖；也利于种质交换。离体保存的意义:一、超低温保存技术（以玉米为例）（1）新建玉米悬浮培养体系。（2）新鲜培养基洗涤悬浮细胞。（3）加入等量的冷冻保护剂脯氨酸。（4）冰上保存1h。（5）冷冻保存，先降温至-30℃，停留半小时，再投入液氮。（6）以40℃水浴解冻，然后培养。工作任务二、限制生长离体试管苗保存（以马铃薯为例）（1）获得马铃薯试管苗。（2）将马铃薯试管苗分割，接种MS培养基，培养基中添加脱落酸和甘露醇，如欲增加

3、保存时间，可以增加培养基用量。（3）以塑料薄膜封闭试管口。工作任务珍宝岛国家级自然保护区华南植物园西双版纳植物园玉米新建悬浮培养体系超低温保存技术（一）新建玉米悬浮培养体系1.种子消毒2.剥离未成熟胚3.愈伤组织诱导培养4.悬浮培养相关实践知识（二）3～4d后用不含脯氨酸的新鲜培养基将上述预处理过的悬浮细胞洗净、重新悬浮培养于新鲜培养基中。（三）将含有20%脯氨酸的冷培养基分成4份并在1h内逐渐加入到等量的冷细胞悬浮液中。（四）将混合液在冰上保存1h后，转移到灭过菌的聚丙烯安剖瓶中，盖好螺帽（每两个安剖瓶中用移液枪接入1mL混合液）。相关实践知识（五）用可控降温仪

4、以1℃/min的速度将按剖瓶冷却到-30℃，并停留30～40min后投入到液氮冰箱中进行贮存。（六）解冻时，从液氮冰箱中取出安剖瓶，直接放到40℃水浴锅中，停留1～2min.（七）将混合液涂在琼脂平板培养基上进行重新培养。（八）细胞生活力检查相关实践知识超低温库马铃薯限制生长离体试管苗保存技术（一）试管苗培养（二）延长试管苗保存期1.培养基中添加脱落酸和甘露醇2.用塑料薄膜封闭试管口3.加入适当多量的培养基种质资源离体保存离体保存方法：低温保存超低温保存生长抑制剂保存相关阅读（一）低温保存一种缓慢生长保存方法，是通过控制培养温度来限制培养物各种生长因子的作用，使培

5、养物生长减少到最低限度。相关阅读低温保存的基本特征是保存材料的定期继代培养，不断繁殖更新；基本措施是控制保存材料所处的温度和光照。延缓保存材料生长速度的另一项措施是改变培养基的成分。种质库要定期检查，保持清洁，及时清除污染材料，并注意积累资料。（二）超低温保存一般以液N2为冷源超低温保存：也叫冷冻保存，指在-196℃的液氮超低温下使细胞代谢和生长处于基本停止的状态，在适宜条件下可繁殖，再生出新的植株，并保持原来的遗传特性。相关阅读1、保存原理低温冰冻过程中，如果生物细胞内水分结冰，细胞结构就遭到不可逆的破坏，导致细胞和组织死亡。植物材料在超低温条件下，冰冻过程中避

6、免了细胞内水分结冰，并且在解冻过程中防止细胞内水分次生结冰而达到植物材料保存目的。植物细胞含水量大，冰冻保存难度大，投放液N2中易引起组织和细胞死亡，故须借助于冷冻防护剂，防止细胞冰冻或解冻时引起过度脱水而遭到破坏，保护细胞。超低温冰箱2、基本程序超低温保存的基本程序包括预处理、冷冻处理、冷冻贮存、解冻和再培养。（1）预处理为保证茎尖在液N2处理后具有稳定且高的存活率，需进行一定的预处理，或在冷冻防护剂存在下进行预培养，或直接进行低温（-3-10℃）预处理。液氮罐（2）冷冻处理a、快速冷冻法指将植物材料从0℃或者其他预处理温度直接投入液氮中保存的方法，降温速度为1

7、000℃/min。要求细胞体积小、细胞质浓厚、含水量低、液泡化程度低的材料。b、慢速冷冻法将处于0℃或其他预处理温度的材料以1-2℃/min的降温速度从起始温度降到-100℃，稳定1h后，投入到液氮保存或以此降温速度连续降温至-196℃的方法。适宜保存的材料有成熟的、含有大液泡和含水量高的细胞，对于保存在悬浮培养中的细胞特别有效。c、预冷冻法指将植物保存材料放入液氮前，需经过短暂时间的低温锻炼的方法。可分为两步冷冻法和逐级冷冻法。可使保存材料细胞内充分脱水，避免因细胞内结冰而导致不可逆伤害的出现。d、干燥冷冻法将材料置于27-29℃烘箱内降低植物含水量，再投入液氮

8、中保存的方