景天三七止血、抗炎物质基础与质量评价的研究.docx

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1、景天三七止血、抗炎物质基础与质量评价的研究景天三七SedumaizoonL,又名养心草,土三七等,广泛分布于我国的福建,浙江,江苏,河南等省。该药具有止血散瘀、安神、解毒之功效,在民间常用于失眠,止痛,跌打损伤,尤其是各类出血症的治疗等。但迄今对景天三七系统功效及其效应物质基础、作用机制研究报道甚少,尤其是抗炎药效物质基础的系统研究尚属空白,严重制约了该药及相关制剂的临床应用和质量控制。基于此,本研究以景天三七为研究对象,对其止血、抗炎效应物质及其质量评价进行较为系统的研究,旨在阐明该药止血、抗炎的物质基础,以揭示其作用机理,并完善其质量评价体系,为该药的民间及临床应用提供科学的依据。首

2、先,查阅国内外景天三七的相关文献,从其生药学、化学成分、质量控制、药理活性等方面完成了文献综述。通过前期研究结果表明,景天三七水提液的乙酸乙酯部位具有良好的止血活性,但其止血成分(群)未明。基于此,本研究进一步对该活性部位的化学成分进行分离纯化,并评价其止血活性。从中分离鉴定了11个化合物,分别是对羟基苯甲酸(I),没食子酸(Ⅱ),原儿茶酸(Ⅲ),香草酸(Ⅳ),胸腺嘧啶(V),咖啡酸(Ⅵ)、5,7-二羟基色原酮(Ⅶ)、邻苯三酚(Ⅶ)、槲皮素(Ⅸ)、山柰酚(X)及木犀草素(Ⅺ)。其中,化合物Ⅲ-Ⅷ为首次从该植物中发现的；在此基础上,选取上述8种化合物,以毛细管法凝血时间及凝血三项——凝血酶

3、原(PT)、活化部分凝血活酶(APTT)和凝血酶(TT)的测定来评价其止血活性,结果显示,没食子酸、香草酸和木犀草素能显著缩短凝血时间和PT,APTT,TT等；此外,咖啡酸也能缩短凝血时间并显著降低PT,APTT。推断景天三七具有良好的止血活性可能与其所含的没食子酸、香草酸、咖啡酸及木犀草素有关,这四种成分是其止血的效应物质。其次,以脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7建立炎症细胞模型,体外筛选景天三七抗炎的活性部位；采用现代分离纯化技术对该活性部位的化学成分进行分离,并进一步评价其抗炎活性。结果初步表明,景天三七抗炎活性部位是其醇提液的乙酸乙酯部位；从中分离出22个化合物并

4、鉴定出21个,分别是：(1)β-谷甾醇,(2)β-胡萝卜苷,(3)齐墩果酸,(4)对羟基苯甲酸,(5)没食子酸,(6)原儿茶酸,(7)香草酸,(8)咖啡酸,(9)5,7-二羟基色原酮,(10)没食子酸甲酯,(11)没食子酸乙酯,(12)槲皮苷,(13)杨梅素,(14)槲皮素,(15)山柰酚,(16)木犀草素,(17)异鼠李素,(18)3’,4’,5,7-四羟基二氢黄酮,(19)木犀草苷,(20)鸢尾酚酮,(21)鸢尾酚酮-2-0-β-D-葡萄糖苷等。其中,化合物18-21也首次从该植物中获得的。通过体外抗炎活性评价,香草酸、槲皮素和异鼠李素等对N0及IL-6分泌有显著地抑制；原儿茶酸、咖

5、啡酸和木犀草素能显著降低炎症细胞所产生的TNF-α及IL-6；杨梅素、3’,4’,5,7-四羟基二氢黄酮和木犀草苷则对NO,TNF-α及IL-6有显著性抑制。结果显示,上述的原儿茶酸、香草酸、咖啡酸、槲皮素、木犀草素、异鼠李素、杨梅素、3’,4’,5,7-四羟基二氢黄酮和木犀草苷等成分是景天三七抗炎的物质基础,其抗炎可能与抑制N0或TNF-α和IL-6水平有关。最后,本研究以指纹图谱结合多成分的定量分析评价景天三七药材的质量。应用HPLC法建立了16个不同产地的景天三七指纹图谱分析方法,通过相似度评价,聚类分析和主成份分析比较,结果显示各批次有一定的差异性,但整体较稳定。其中福建南平、河

6、南,浙江和福建连城产的景天三七,与其他产地之间差异较大,主成分分析及聚类分析分别将其划为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类。综合比较分析,山西,甘肃,广西,湖北,云南产的景天三七整体品质较均一稳定。在此基础上,以HPLC法定量分析了该药材中槲皮素、木犀草素、山柰酚及异鼠李素等黄酮类和没食子酸、没食子酸甲酯及对羟基苯甲酸等酚类成分。结果表明,上述成分各批次在数量上或质量上有明显的差异。