操作规范及注意事项.doc

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1、安捷伦液相操作规程及注意事项一、开机1.接通电源，打开计算机，进入windows操作系统；2.检查色谱柱（型号是否正确及进出口有无接反）；3.检查流动相（是否正确，溶剂是否够用）；4.打开主机各模块，待其完成自检后，双击桌面联机系统(online)，单击view，选择方法和运行控制画面；5.排气：逆时针旋转排气阀60-90°，右击“四元泵”图标出现快捷键，点击method选项进入泵编辑画面。将泵流量设到5mL/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体2-3分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止，查看柱前压力（若大于10bar，

2、则应更换排气阀内过滤白头）。依次切换到B、C、D管道分别排气；6.将泵流量设为0.5mL/min，设定溶剂配比，关闭排气阀。随后将泵流量设为0.8mL/min，2min后设为1mL/min，冲洗柱子20-30min；7.待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况，待基线稳定后即可进样。二、采集方法编辑1.编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据文件名及存储路径等；2.编辑方法信息：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项。选中项单击“确定”入下一画面“方法注释”，编辑好单击“确定”进入下一画面“选择进样源”，

3、选中Als单击“确定”入下一画面“设置方法”进行参数设定。最后保存方法；3.设置泵参数：在“流速”处输入流量，在“溶剂”处选中输入相应比例，在右面注释栏中标明各溶剂的名称；设置“stoptime”和“posttime”，在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如：250bar，在“时间表”添加编辑梯度；4.设定进样器参数：在进样模式中输入进样量。标准进针：只能输入进样体积不能洗针。针清洗后进样：可以输入进样体积和洗瓶位置，针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。注意：洗针瓶不盖盖子，以免污染针外表面。1.进样器进样程序参数设定：选中使用进样

4、程序，在“函数”中添加相应函数即可按程序进样。2.检测器参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度，并选中它，右侧选中“与左侧相同”——使柱温箱的温度左右一致。3.VWD检测器参数设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm，在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min(2s)，再设置“停止时间”和“后运行时间”。4.仪器曲线设置：默认即可。一、关机1.关机前，用95%水冲洗柱子和系统15-30min，流量0.5-1mL/min，再用100%有机溶剂冲0.5h，然后关泵；2.退出化学工

5、作站，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）；3.关掉主机电源开关。四、泵1.流动相流动的顺序：脱气机à泵（排气阀拧60°即可，不能过大，最大不超过90°。排气时流速设为5时会有少量液体流出）à流通阀（此台高液采用的是被动阀，被动阀的优点是耐用，但是当流速小于0.5ml/min时性能不如主动阀）à进样器à柱温箱（流动相进柱前可预热，预热体积可为3ul、6ul、9ul。预热流动相的好处是使流动相与色谱柱温差不至于太大，减少气泡的产生，减少鬼峰的出现，使色谱峰保留时间稳定。左右两边的加热板温差不能相差太大，一般设为等值）à检测器（氘灯紫外

6、，钨灯红外）。2.阻尼器的作用：维持恒定的流速，减小脉冲。五、DAD1.DAD检测器（流通池）中液体的流速应最好小于2ml/min，最大不能超过4ml/min；而蒸发光检测器流速一定要小于2ml/min，流速越大，则在漂移管中产生的液滴越大，越难蒸发，容易造成积水；六、ELSD1、ELSD检测器主要用于分析检测半挥发性的物质，但所分析的样品的挥发性要低于流动相，且流动相不能用盐，因为盐难挥发。检测原理：首先柱洗脱液在雾化器中雾化形成气溶胶（雾化气体为N2），然后气溶胶中的挥发性成分在加热的漂移管中蒸发，在漂移管里，气溶胶中大的液滴从废液管排出

7、，悬浮于流动相蒸汽中的样品颗粒从漂移管进入到光散射检测池。在检测池中，样品颗粒散射激光光源发出的光而蒸发的流动相不散射。散射光被检测，产生电信号最后被转化为数据显示出来；1、蒸发光散射检测器所用第一瓶氮气一定要纯氮，以后可用95%氮气；2、当需要使用蒸发光检测器时就在工作站中把蒸发光检测器加入，不用时则删除，加入或删除ELSD是需再关闭工作站才生效。使用蒸发光检测器时要先开气再开流动相，否则流动相会全积在漂移管中。蒸发光检测器的温度一般设为40℃，过高噪音会大，过低流动相等不易挥发。N2压力为3.5Bar。Filter为1s，虽然Filter

8、值越大基线越平，但图像会失真。Gain值6-7。Offset值大于1100的话ELSD则采集不到信号了。清洗蒸发光检测器的方法：将样品管拔掉，开氮气半个小时即可；3