2021届高考生物必背知识手册（浙科版）专题04 生物技术实践.docx

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1、专题四选修一生物技术实践必背知识实验一大肠杆菌的培养和分离【考点一】培养基1、培养基配置①微生物的生命活动需要五大营养要素：水、无机盐、碳源、氮源、生长因子；②有的物质既是碳源又是氮源（为微生物生长提供碳元素和氮元素），如：蛋白质、蛋白胨；③有的既是碳源又是生长因子（是微生物生长不可缺少的微量有机物），如：酵母提取物；④“细菌喜荤，霉菌喜素”；细菌喜37℃的温度；霉菌喜25-30℃的温度；⑤细菌的培养基：蛋白胨、酵母提取物、一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；通常在中性偏碱的环境中生长；⑥霉菌的培养基：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁

2、即可；通常在中性偏酸的环境中生长；⑦在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要适宜的pH、温度以及特殊营养物质，以满足微生物生长对的要求。2、培养基的种类及用途：①液体培养基：呈现液态，用于扩大培养和工业生产；②固体培养基：配制时需加入琼脂（凝固剂），呈固态，用于菌种分离、鉴定、计数等；③我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，用LB固体培养基来分离大肠杆菌。【考点二】灭菌和消毒1、无菌技术：人们利用微生物完成一定的反应，必须要求某种微生物是没有被其他微生物污染的，因此，在培养微生物时必须进行无菌操作；2、灭菌是用物理或化学的

3、方法，杀死或除去环境中的一切微生物的方法。杀死病原菌的方法叫消毒。如：实验室要对使用前和使用后的培养基、各种容器进行灭菌；要对实验服、对病人的排泄物和衣物进行消毒。3、干热灭菌法：是利用火焰将接种环和试管上的微生物烧死（又称灼烧灭菌法），或在140-160℃的烘箱中加热2-3h，将微生物的营养体和芽孢杀死。4、加压蒸气灭菌法（高压蒸气灭菌法）：这是生产和实验室常用的灭菌法，将灭菌锅内通入压力达到1000g/cm2的高压蒸气，锅内温度达121℃，持续15-30min，即可达到灭菌目的；注意：当培养基内有葡萄糖时，为防止葡萄糖分解碳化，要用

4、500g/cm2压力（90℃以上）灭菌30min。5、过滤灭菌法：有些化合物（尿素、碳酸氢钠等）加热会分解，如培养基中需要时，只能配成溶液单独过滤灭菌；通常用G6玻璃砂漏斗过滤。其他型号（如：G1-G5）的不能除菌。（注意：玻璃砂漏斗使用方法：使用前也要用高压蒸汽灭菌，玻璃砂漏斗有6种型号，即G1-G6，G6孔径最小，细菌不能滤过，在使用后需要用1mol/L的HCl浸泡，并抽滤去酸，再用蒸馏水洗至洗出液至中性，干燥后保存）6、紫外线光灭菌法：紫外光谱范围是100-400nm，可使菌体的蛋白质和核酸变性，芽孢可在10min内杀死。注意：紫

5、外线对人的皮肤、眼睛等会造成伤害，开启紫外线灯后，人必须离开。7、各种大小的培养皿、试管、三角瓶、取样器的头、移液管、三角刮刀、接种环、镊子等等，这些用具通常用高压蒸汽灭菌法灭菌：试管需加棉花塞或塑料盖；三角瓶可用封口膜或6层纱布封口；移液管上端用镊子放入少量棉花；各种用品均用牛皮纸或报纸包好；在121℃（1000g/cm2压力）下灭菌15-30min；将实验用具放入60-80℃的烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分；8、在进行实验操作前，将需要使用的用具从烘箱中取出，放到超净台上，然后打开紫外线灯和过滤风，灭菌30min。9、实验中用的棉花

6、不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。灭菌通常在60～80℃烘箱中除去灭菌时的水分；10、在用任何器皿转接时，瓶塞和封口膜只能夹在手上，不许放在台面上，接种时要在酒精灯火焰旁操作；【考点三】细菌的培养和分离1、接种时，先将接种环在明火上烧红后冷却，然后蘸取带菌的培养物，放到新的培养基中；（注意a.取菌种前，灼烧接种环的目：消灭接种环上的微生物；b.除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环，目的是：消灭接种环上残留菌种；c.取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种；d.实验结束后灼烧接种环的目的：防止细菌

7、污染环境和操作者）2、（划线分离法）用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分的细菌间距离加大。3、（涂布分离法）先将培养的菌液稀释，通常稀释10-5～10-7倍，取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的菌落。通常每个培养皿有20个以内的单菌落最为适合。（注意：使用玻璃刮刀或镊子时，把从70%酒精中取出的刀或镊子放在火焰上使酒精燃烧，但不要在火焰上加热，酒精燃尽后即可使用）4、划线分离

8、法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂些。细菌的两种分离法各有优点，都可采用。5、接种后，培养皿必须倒放在恒温培养箱中；因为正放时，水分形成的水滴会落入培养基表面，水流扩散会使菌落的菌体扩散，