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《gb 4789.40-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属（阪崎肠杆菌）检验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准GB4789.40—2016食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布国家食品药品监督管理总局GB4789.40—2016前言本标准代替GB4789.40—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验》、SN/T1632.1—2013《出口奶粉中阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)检验方法第1部分:分离与计数》。本标准与GB4789.40—2010相比,主要变化如下:———标准名称修改为“食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠
2、杆菌)检验”;———修改了可疑菌落的挑取数量。ⅠGB4789.40—2016食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验1范围本标准规定了食品中克罗诺杆菌属(Cronobacter)的检验方法。本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中克罗诺杆菌属的检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:2.1恒温培养箱:25℃±1℃,36℃±1℃,44℃±0.5℃。2.2冰箱:2℃~5℃。2.3恒温水浴箱:44℃±0.5℃。2.4天平:感量0.1g。2.5均质器。2.6振荡器。2.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10m
3、L(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。2.8无菌锥形瓶:容量100mL、200mL、2000mL。2.9无菌培养皿:直径90mm。2.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.11全自动微生物生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1缓冲蛋白胨水(bufferpeptonewater,BPW):见A.1。3.2改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(modifiedlaurylsulfatetryptosebroth-vancomycinmedium,mLST-Vm):见A.2。3.3阪崎肠杆菌显色培养基。3.4胰蛋白胨大豆琼脂(trypticasesoyagar,TSA):
4、见A.3。3.5生化鉴定试剂盒。3.6氧化酶试剂:见A.4。3.7L-赖氨酸脱羧酶培养基:见A.5。3.8L-鸟氨酸脱羧酶培养基:见A.6。3.9L-精氨酸双水解酶培养基:见A.7。3.10糖类发酵培养基:见A.8。3.11西蒙氏柠檬酸盐培养基:见A.9。1GB4789.40—2016第一法克罗诺杆菌属定性检验4检验程序克罗诺杆菌属检验程序见图1。图1克罗诺杆菌属检验程序5操作步骤5.1前增菌和增菌取检样100g(mL)置灭菌锥形瓶中,加入900mL已预热至44℃的缓冲蛋白胨水,用手缓缓地摇动至充分溶解,36℃±1℃培养18h±2h。移取1mL转种于10mLmLST-Vm
5、肉汤,44℃±0.5℃培养24h±2h。5.2分离5.2.1轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物,各取增菌培养物1环,分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板,显色培养基须符合GB4789.28的要求,36℃±1℃培养24h±2h,或按培养基要求条件2GB4789.40—2016培养。5.2.2挑取至少5个可疑菌落,不足5个时挑取全部可疑菌落,划线接种于TSA平板。25℃±1℃培养48h±4h。5.3鉴定自TSA平板上直接挑取黄色可疑菌落,进行生化鉴定。克罗诺杆菌属的主要生化特征见表1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。表1克罗诺杆菌属的主要生化特征生化试验特
6、征黄色素产生+氧化酶-L-赖氨酸脱羧酶-L-鸟氨酸脱羧酶(+)L-精氨酸双水解酶+柠檬酸水解(+)D-山梨醇(-)L-鼠李糖+发酵D-蔗糖+D-蜜二糖+苦杏仁甙+注:+>99%阳性;->99%阴性;(+)90%~99%阳性;(-)90%~99%阴性。6结果与报告综合菌落形态和生化特征,报告每100g(mL)样品中检出或未检出克罗诺杆菌属。第二法克罗诺杆菌属的计数7操作步骤7.1样品的稀释7.1.1固体和半固体样品:无菌称取样品100g、10g、1g各三份,分别加入900mL、90mL、9mL已预热至44℃的BPW,轻轻振摇使充分溶解,制成1∶10样品匀液,置36℃±1℃培
7、养18h±2h。分别移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤,44℃±0.5℃培养24h±2h。7.1.2液体样品:以无菌吸管分别取样品100mL、10mL、1mL各三份,分别加入900mL、90mL、9mL已预热至44℃的BPW,轻轻振摇使充分混匀,制成1∶10样品匀液,置36℃±1℃培养18h±2h。分别移取1mL转种于10mLmLST-Vm肉汤,44℃±0.5℃培养24h±2h。3GB4789.40—20167.2分离、鉴定同5.2和5.3。8结果与报告综合菌落形态、生化特征,根据证实为克罗诺杆菌属的阳性管数,查MPN
