肥达氏反应的操作规程

肥达氏反应的操作规程

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1、肥达氏反应的操作规程[实验原理]本法是以伤寒"O","H";甲、乙、丙副伤寒分别培育,经甲醛处理杀死后,做成菌液供肥达氏应用,用以伤寒的辅助诊断。[操作方法]1、取康氏试管,排成5×7形式,5排分别编成O,H,A,B,C;2、另取大试管一支,加入病人血清0.25ml,用4.75ml生理盐水作1:20稀释,取2.5ml该稀释血清于每排第一管内分别注入0.5ml;3、再取2.5ml生理盐水把大试管内血清作2倍稀释,取2.5ml该稀释血清于每排第二管内分别注入0.5ml,以此类推,每排最后一管加0.5ml生理盐水作阴性对照,各稀释度:1/20,1/40,1/80,1/160,1/320。然后于前六

2、管中逐管加入1:10稀释的各菌液0.5ml,各终稀释度:1/40,1/80,1/160,1/320,1/640。4、充分振荡混匀,于37℃放置16-20小时判定结果。[结果判定]根据凝集反应的强弱和有无,分别以4+,3+,2+,1+,-,记录,以呈现(2+)的血清最高稀释度为终点效价。4+:液体清澈透明,菌体全部被凝成块,沉于管底。3+:液体较透明,大部分菌体被凝集而沉于管底。2+:液体稍透明,管底有少量凝集沉淀物。1+:液体较混浊,可见极少量凝集物。-:液体混浊,细菌因重力下降于管底呈边缘光滑圆点(与对照管相似)。[结果分析]ⅰ)首先应考虑当地正常人效价(正常效价)。一般以单份血清凝集效价

3、:0效价应达1:80以上、H效价应在1:160以上,PA和PB应达1:40以上方有诊断价值;若病程中第2次血清效价比第1次高4倍以上亦有诊断价值。ⅱ)由于H凝集素在血内保持时间较久,0凝集素较短暂,所以曾接种过伤寒、副伤寒菌苗者,0凝集效价在诊断上较重要。ⅲ)真正的伤寒病人,0凝集素常较H凝集素出现早、但维持时间较短;H凝集素出现较晚、但效价较高且持续时间较长。ⅳ)回忆反应:过去曾接种过伤寒、副伤寒菌苗或患过伤寒、副伤寒病,近期又发生感染如流感、肝炎、结核病等,可非特异地产生较高的H凝集素和较低的0凝集素,此现象称为回忆反应。ⅴ)若0效价高而H不高(对正常效价而言),则可能是感染早期或与伤寒

4、杆菌0抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。ⅵ)确诊为伤寒的患者中,约有10%的患者该试验始终阴性或效价不高,故阴性结果不能排除伤寒的诊断。ⅶ)采血时间不同,肥达式反应的阳性率也不同。发病第1周约为50%;第2周80%;第4周90%以上。恢复期效价最高,以后逐渐下降,直至转阴。一般以双份血清(急性期和恢复期)对比,效价有明显上升者作为新近感染的指征。[注意事项]1、应在光亮处观察管底凝集状态,轻轻摇动判定结果,不能剧烈振荡。2、菌液稀释后应及时使用。3、菌液中有摇不散的凝块时,不能使用。4、应在标签载明的有效期内使用。

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