正相和反相柱层析组合分离纯化紫杉醇

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1、!"卷!期生物工程学报%&’(!")&(!#$$$年!月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12*+,-+./#$$$!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!正相和反相柱层析组合分离纯化紫杉醇张志强!苏志国#!（大连理工大学生化工程研究所大连!!"$!#）#（中国科学院化工冶金研究所生化工程国家重点实验室北京!$$$1$）摘要采用正相氧化铝柱层析和反相5柱层析从东北红豆杉培养细胞浸提物中分离纯化了紫杉醇。优化了氧!1化铝柱层析和反相柱

2、层析的操作条件。实验发现，经过氧化铝柱层析后，测得的紫杉醇量大大增加。经两步层析，使紫杉醇的含量从小于!6$7提高到087，样品中微量杂质继以重结晶步骤除去，即可获得纯度超过017的紫杉醇晶体。采用!45)9:对晶体分析，所得产物结构与文献上紫杉醇的结构一致。关键词紫杉醇，正相柱层析，分离纯化中图分类号;1!46!文献标识码<文章编号!$$$24$"!（#$$$）$!2$$"02$8从红豆杉树中分离出的紫杉醇（=+>&’）是近#$化学品有限公司生产。分子筛（?<）购于北京化学年来发现的最有效的天然抗癌药物［!］，因紫杉醇的试剂公司。抗癌

3、作用独特，几年来引起了世界各国的重视。最!"!"#仪器：JB238$@AB5仪为KL5M9<)公司初，紫杉醇是从天然红豆杉树皮中提取分离得到的，产品。NO2"<旋转蒸发器为北京科龙仪器公司产其在树皮中的含量平均为万分之一点五，提取所得品。=/PI5常压层析系统为AG+.F+QD+公司产品。到的实际上平均为万分之一［#］。为解决紫杉醇有!"#实验方法限的药源及防止天然红豆杉树的乱砍乱伐问题，一!"#"!紫杉醇粗品的制备：收集东北红豆杉培养方面，国内外学者围绕红豆杉植物的栽培、紫杉醇的细胞，室温下每克干细胞用!$$FB甲醇浸泡#R，过化学合

4、成、红豆杉的组织和细胞培养进行了有益的滤，取滤液用旋转蒸发器在?$!8$S蒸发，回收甲探索［4，?］；另一方面，研究高效、经济的提取分离方醇，所得固体物每克溶解于!$FB三氯甲烷中备用。法，尽量避免产物的损失。有关紫杉醇的提取分离!"#"#氧化铝柱层析：甲醇及三氯甲烷等溶剂每的研究，已有不少报道。液2液萃取、层析和高效液升用4$克分子筛脱水，层析用氧化铝在!0$S、!托相色谱（@AB5）往往是必不可少的［8］。液2液萃取过的真空下干燥"G，用脱水的三氯甲烷充分浸泡并脱程消耗大量的有机溶剂，产生废水污染环境。气后，装成!8FFT#8$FF

5、的层析柱。三氯甲烷清@AB5精制过程设备和介质投资大，生产成本高。洗柱后上样，用三氯甲烷淋洗去未被吸附的杂质，然如果能用几种常压层析的组合来取代萃取和后采用不同浓度的甲醇／三氯甲烷进行洗脱，确定并@AB5，则有可能发展一条简捷、低成本的分离纯化收集洗脱出的紫杉醇峰，用旋转蒸发器在?$!8$S路线。本文在这一方面做了初步的探索。蒸发，从所得固体物中取样，@AB5测定其纯度。柱层析在常温常压下操作。!材料和方法!"#"$反相柱层析：将制备的5!1烷基2硅胶用乙!"!材料、仪器腈充分浸泡，脱气后，重力沉降法装成!8FFT!"!"!材料：东北红

6、豆杉培养细胞由本实验室提#"$FF的柱，用乙腈充分洗出胶中的杂质，再用供［"］。紫杉醇对照品为CDEF+产品，纯度大于?$7乙腈水溶液平衡。经氧化铝柱层析初步纯化的007。5!1烷基2硅胶色谱填料（!$$!#$$目，5含量紫杉醇固体样品，重新溶解于?$7乙腈水溶液后上大于#$7）参照CGDG2@HDI,等［3］的方法由本实验室柱，并用不同浓度的乙腈水溶液进行洗脱，收集紫杉自制。层析氧化铝（#$$!4$$目）为上海新诚精细醇洗脱峰，@AB5测定纯度，层析过程在常温常压下收稿日期：!0012!$2#0，修回日期：!0002$32##。基金项

7、目：国家自然科学基金重点项目（#034"!1$）。"联系人。现地址（!$$$1$）北京中国科学院微生物研究所资源室。生物工程学报+E卷J)!"#紫杉醇样品的结晶表%紫杉醇分离纯化的结果经两步层析，紫杉醇的纯度可以达到!"#。此&’()*%+*,-).,/0.’1/)2-34045’.4/6时的样品中仍有少量的杂质，采用$%&’%(%)’结,-./012-345／6713824／679:;<-=／#>.?2@.;=／#晶，就可使紫杉醇的纯度提高到!*#以上。东北红A;:B.036/4."CCC&)D"CDE"+CC豆杉培养细胞浸膏采用本工

8、艺分离精制的总结果如F4)’&?G;263-27;H)CID+""D!)JDI+J)D+表+。!;H/H?G;263-27;"+DEI!D)!"D&+"+DI!"$紫杉醇的鉴定本工艺分离和精制的紫杉醇样品的