抗体检测知识点——抗体检测方法

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1、抗体检测知识点——抗体检测方法（一）中和反应 　　中和反应不仅测定抗体是否存在，而且测定抗体是否具有免疫保护作用，因而，尽管这种方法复杂费时，影响因素众多而且不稳定，在预防医学领域特别是病毒性疾病中，仍然是不可取代的抗体检测方法。 　　中和试验的基本方法是，将待检物质与活的致病微生物混合，感染实验动物或敏感的细胞，然后观察实验动物是否发病、死亡，或细胞是否发生病变。 　　早期中和实验主要利用疾病的动物模型进行，目前，在病毒性疾病领域，通常利用培养病毒的细胞进行。在结果的解释中应当注意，细胞的中和试验通常只反应抗体阻断病毒进入细胞的能力，这只是病毒致病过程中的一小部分。 　　（

2、二）沉淀反应 　　血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合出现沉淀物，这类反应称为沉淀反应。该类反应可检测到20～2mg／ml水平的抗体。较常用的检测方法有： 　　1．单向免疫扩散 　　将一定量已知抗原混于琼脂中制成琼脂板，在适当位置打孔后将抗体加入孔中扩散，抗原抗体在扩散过程中形成以抗体孔为中心的沉淀环，可用于检测血清中的IgG、IgM、IgA和补体C3等的含量。 　　2．双向免疫扩散 　　将抗原与抗体分别加于琼脂凝胶中，二者自由向四周扩散，在相遇处形成沉淀线。可用于抗体的定性、定量检测。 　　（三）凝集反应 　　细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形

3、成凝集团块，这一类反应称为凝集反应，该类反应可检测到1μg／ml。 　　1．直接凝集 　　将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌或红细胞凝集现象。检测方法有两种：一是玻片凝集试验，用于定性测抗原，多用于快速诊断；二是试管凝集试验，在试管种系列稀释待检血清，加入已知颗粒抗原（死菌或活菌，多用死菌），进行的血清反应，用于定量检测抗体。温箱中放24小时后取出反应管在室温放2个小时再判断为宜，判定凝集滴度以凝集程度为++而定。 　　2．间接凝集 　　将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表明，与相应抗体反应出现颗粒凝集的现象。如用γ球蛋白包被的乳胶颗粒，检测病人血清中的一种抗γ球蛋

4、白的抗体（类风湿因子）。 　　（四）补体参加的反应 　　利用抗体与红细胞上的抗原结合，激活反应体系中的补体，导致红细胞的溶解，用溶血现象作为指示系统帮助结果判定。常用的方法有补体结合试验和溶血空斑试验。 　　（五）用标记抗原进行的抗原抗体反应 　　利用荧光素、酶或放射性核素等标记物标记抗原或抗体，进行的抗原抗体反应。灵敏度高、快速，可定性或定量，甚至定位等优点。 　　1．免疫荧光 　　将已知细菌、感染病毒的细胞等颗粒抗原等固定于载玻片，加待检血清反应后，再 　　加荧光素标记的抗抗体，置荧光显微镜下观察判定，用于检测抗体。 　　2．酶免疫测定 　　是用酶标记的抗体进行的抗原抗体

5、反应。可用目测定性，也可用酶标测定仪测定光 　　密度（OD）值以反应抗体的含量，敏感度可达ng／ml甚至pg／ml。常用于标记的酶有辣 　　根过氧化物酶、碱性磷酸酶等。常用的方法有酶联免疫吸附试验（EUSA）。采用双抗体 　　夹心法或间接法检测特异抗体。 　　3．放射免疫测定法 　　用放射性的核素（125I和131I）标记抗原，检测抗体，灵敏度达pg／ml。 　　4．免疫印迹法 　　将凝胶电泳与固相免疫结合，把电泳区分的蛋白质抗原转移置NC或PVDF等膜 　　上。检测特异的抗体。用该法检测血清HIV抗体为诊断HIV感染的方法之一。