血凝仪检测原理及应用解析教学提纲.ppt

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1、血凝仪检测原理及应用解析（二）DIC筛选试验组合：PT、APTT、TT、Fib-C、D-二聚体、FDP、AT-Ⅲ（三）血友病组合：PT、APTT、TT、Ⅷ:C、Ⅸ:C、Ⅷ抑制物检查（四）凝血因子全套检查：PT、APTT、TT、Fib-C、Ⅱ:C、Ⅶ:C、Ⅷ：C、Ⅸ:C、Ⅹ:C、Ⅺ：C2（五）药物性出血的监测1.口服华法林治疗监测组合：PT2.普通肝素治疗监测组合：TT、APTT、AT-Ⅲ3.溶栓药物治疗（SK、UK、t-PA）监测组合：PT、APTT、D-二聚体、TT、Fib-C、FDP3出血血栓形成正常止血血栓4三个阶段，两个途径（内源性、外源性）第一阶段：凝血酶原激活物形成第二阶段：

2、凝血酶形成第三阶段：纤维蛋白形成5凝子因子参与的凝血途径内源性凝血途径：Ⅷ，Ⅸ，Ⅺ，Ⅻ外源性凝血途径：Ⅲ，Ⅶ共同凝血途径：Ⅰ，Ⅱ，Ⅴ，Ⅹ，ⅩⅢ67传统的凝血途径的修改外源性的Ⅶ因子在组织因子的结合下既可激活Ⅹ因子，又可激活内源性的第Ⅸ因子，从而打破了内源与外源的界限。Ⅻ因子缺乏时并不引起出血，这说明第Ⅺ因子并不一定只被Ⅻ因子激活，现已证明Ⅺ本身具有自身激活作用。凝血酶（Ⅱ因子）也可激活Ⅺ因子，原来认为只有Ⅻ因子才能激活Ⅺ因子。TF被激活并与Ⅶ因子结合后会被一种组织因子途径抑制物（TFPI）所抑制；后者已成为一种新型抗凝剂。8二、凝血检验标本收集和预处理9（一）标本采集1.抽血注意事项（1

3、）抽血管首选优质塑料管；（2）定量抽血完毕，立即将标本轻柔颠倒混匀5次，避免剧烈摇动；（3）许多专家建议抽血的第一管血不用作血栓试验，尽量选第二管。102.抗凝剂问题（1）世界卫生组织/美国临床和实验室标准协会（WHO/CLSI）都推荐使用0.109mol/L枸橼酸钠（3.2%Na3C6H5O7﹒2H2O）作为凝血检验的抗凝剂；（2）一般选用1份抗凝剂+9份静脉血—当Hct25%～55%时；（3）若Hct＜25%或＞55%时，抗凝剂的用量=0.00185×全血量×[1-Hct]×100；11Hct异常时抗凝剂和抽血量12高Hct的影响病例：真性红细胞增多症患者，Hct0.562（1）1：

4、9比例抗凝结果（错误）：PT19.2s，PT-INR1.78，APTT62.1s，Fib-C1.67g/L，TT22.9s，与临床不符。（2）0.20.00185×（100-56.2）计算后应抽血2.5ml，结果（正确）为：PT13.9s，PT-INR1.30，APTT36.2s，Fib-C1.70g/L，TT19.7s，与临床相符。13（二）离心问题1.血栓试验使用的血浆为PPP；2.一般要求2000～2500g/min（3000r/min），离心时间为10min左右，转速N（转/分）与“g”的转换关系：g=11.18×10-7×半径（mm）×N（转/分）；3.离心温度室温即可，但不可

5、超过25℃，4℃离心条件应该提倡。14（三）即时试验标本的要求1.标本尽可能在4小时内完成；2.筛查试验和一些因子测定时，应避免将标本长时间室温放置；3.Ⅶ因子测定时，标本要避免冷藏。15（四）分离后血浆标本的处理1.建议将标本保存在-70℃以下条件，凝血因子至少可稳定6个月；2.短期保存可在-35℃条件，-20℃条件通常是不理想的；3.冷冻血浆解冻应放置37℃水浴条件，并轻轻摇动4～5分钟，分析前轻柔地颠倒混匀。室温放置自然解冻是不可取的，因室温放置会有冷沉淀形成，Ⅷ:C和vWF会减少，并有纤维蛋白原析出。冷冻过的血浆不能再次冷冻。16XIIXIIXVIII外源凝血途径检查PT内源凝血

6、途径检查APTT组织因子VII+XXaII凝血酶原IIa（凝血酶）I(FIB)Ia(凝块)V组织因子途径TFTFPI共同途径途径检查TT凝血途径示意图17三、凝血酶原时间测定（PT）18IIIIVPLIIICa　,PL2+Ca　,PL2+XIIVIIXIIIIIXVIIIVIIVIVIIIIIXIXIIinBlood血液中inPlasma血浆中PTReagentFibrinExtrinsicSystem外在系统MeasureClottingTimewithoutTissueFactorCalcium（Ca）2+BloodSamplingwithoutwithoutTrisodiumCit

7、rateNormalRange9-14sec37℃XVIXIIXIIIXVIIIXVIIIVIVIIIIIIPhospholipidXIXIII（一）检测原理19PT检测的原理在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子，使凝血酶原变为凝血酶，后者使纤维蛋白原与转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需的时间即为凝血酶原时间。CA1500仪器法判断终点采用光学法，即当纤维蛋白原转变为纤维蛋白时，经光照后产生的散射光发生变化，仪器判读终点。20（