乙肝疫苗生产发展简介.ppt

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1、基因工程产品的成功例证生物技术应用的典范甲基营养型酵母-----汉逊酵母重组酵母乙肝疫苗HepatitisBVaccine疫苗的生产1，灭活死疫苗患者---分离出致病微生物（细菌或者病毒）-----通过培养细菌（培养基）或者病毒（细胞），获得大量的致病微生物---用甲醛灭活（杀死）致病微生物---纯化---铝吸附-----灭活死疫苗。2，减毒活疫苗患者---分离出致病微生物（细菌或者病毒）-----通过改变培养条件，获得不再致病微生物---培养不再致病微生物，获得大量的不再致病微生物---铝吸附-----减毒活疫苗。乙肝病毒的体外培养至今没有成功前面，我们已经讲过，细

2、菌要在培养基中繁殖，病毒要在细胞中繁殖，比如，流感病毒在鸡胚细胞中生长，狂犬病毒要在地鼠肾细胞中生生长，乙脑病毒要在vero细胞中生长。可是乙肝病毒在所有实验过的细胞中都不能生长。乙肝疫苗的研究受到了严重的困难。人们不得不寻求其他的途径去生产乙肝疫苗。乙肝抗原的来源1，乙肝患者的血液：血源性乙肝疫苗。2，利用DNA重组技术构建重组微生物（酵母）表达（合成）乙肝抗原：基因工程乙肝疫苗乙肝疫苗发展历史1,1963年Blumberg发现在血友病患者的血清中存在一种抗体，这种抗体能与澳大利亚土著人血液中的一种抗原起交叉反应，这种抗原被命名为“澳大利亚”抗原。2,1968年Pri

3、nce在血清型肝炎（乙型肝炎）患者血清中发现抗原性与澳大利亚抗原相同的病毒样颗粒，进而初步认定澳大利亚抗原就是乙肝表面抗原。3,1970年Dane用电子显微镜在乙肝患者血清中发现直径为42nm完整乙肝病毒颗粒及直径为22nm的球形和杆形的乙肝表面抗原。4,1971年Krugman发现加热处理的急性期乙肝患者的血清能部分预防乙肝感染。5,1981年Merck公司在世界上首次研制成功第一代乙肝疫苗——血源性乙肝疫苗。6,1985年北京生物制品研究所在国内首次研制成功血源性乙肝疫苗.7,1986年Merck公司在世界上首次研制成功第二代乙肝疫苗-----重组酵母乙肝。8,19

4、89年北京生物制品研究所与Merck公司签订合同，引进重组酵母乙肝疫苗工业化生产技术。1993年5月开始试生产。9,90年代德国莱茵生物技术公司发展了一种甲基营养型酵母---汉逊酵母表达系统,其乙肝表面抗原表达水平可达到500-1000mg/L.南韩绿十字疫苗公司应用该表达系统实现了重组汉逊酵母乙肝疫苗的大规模工业化生产。10,大连高新（汉信）生物制药有限公司从1998年开始重组汉逊酵母乙肝疫苗的研制工作，在2002年6月获得了国家药品监督管理局颁发的“新药证书”，在2003年开始商业化生产。11,华兰生物在2009年也将开始重组汉逊酵母乙肝疫苗的生产。乙肝疫苗的发展历

5、史第一代乙肝疫苗；血源性乙肝疫苗。第二代乙肝疫苗；基因工程乙肝疫苗。基因工程乙肝疫苗1，CHO细胞乙肝疫苗。2，重组酿酒酵母乙肝疫苗。(第一代重组酵母乙肝疫苗）3，重组汉逊酵母乙肝疫苗。(第二代重组酵母乙肝疫苗）乙肝疫苗的发展历程：n80年代初期-----血源性乙肝疫苗（第一代乙肝疫苗）。1995年停产。n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝疫苗）。包括：重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度偏低。重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，母婴阻断效果不理想重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1

6、-3mg/L，无法实现工业化生产。n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的基因工程乙肝疫苗。国外主要的乙肝疫苗生产厂家厂家疫苗美国默克公司Merck重组酿酒酵母乙肝疫苗比利时史克公司Smithkline重组酿酒酵母乙肝疫苗法国巴斯德研究所PasteurMerieux重组CHO细胞乙肝疫苗德国莱茵公司下属的韩国绿十字疫苗公司GreenCross重组汉逊酵母乙肝疫苗国内主要的乙肝疫苗生产厂家厂家疫苗北京天坛生物制品股份有限公司(北京生物制品研究所）重组酿酒酵母乙肝疫苗深圳康泰生物制品公司重组酿酒酵母乙肝疫苗华北药厂和长春生物制品研究所等重组CHO细胞乙肝疫苗大连高

7、新(汉信）公司和华兰生物疫苗公司重组汉逊酵母乙肝疫苗国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较厂家种菌发酵细胞破碎粗纯精纯吸附北京深圳啤酒酵母四级发酵高压破碎硅胶吸附疏水层析原位吸附大连汉信汉逊酵母四级流加球磨破碎PEG硅胶吸附DEAE分子筛区带普通吸附华兰生物汉逊酵母四级流加高压破碎硫酸铵沉淀疏水DEAE分子筛普通吸附公司菌种的表达水平纯化的收率北京深圳50mg/L20%大连汉信150-200mg/L15%华兰生物200-300mg/L20%新乡华兰，大连汉信，北京天坛华兰：菌种好，表达水平高，纯化收率高，所以，总体而言，华兰公司的技术更为先进。北京