四培养基与设备灭菌教学提纲.ppt

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1、四培养基与设备灭菌微生物的代谢调节和代谢工程原则：经济合理地利用和合成所需的各种物质和能量，使细胞处于平衡生长状态。方式：反馈抑制、反馈阻遏、酶的诱导调节、酶的共价修饰。生产目的：高浓度地积累人们所期望的产物。办法：①育种，得到根本改变代谢的基因突变株；②控制微生物培养条件，影响其代谢过程。代谢工程：利用基因工程技术，扩展和构建、连接，形成新的代谢流。（也称途径工程）一、微生物的代谢类型和自我调节1.代谢类型：分解代谢和合成代谢。相互关联，相互制约。细胞优先合成异化可维持更快生长的化合物的酶。利用完后，再合成下一个酶。2.微生物自我调节部位：①细胞膜的屏障作用（多数亲水分子）

2、和通道；②控制通量，调节酶量和改变酶分子活性；③限制基质的有形接近，可存在于不同细胞器各个代谢库中，其酶量差别大。二、酶活性的调节代谢调节是指在代谢途径水平上酶活性和酶合成的调节。酶活性调节：激活剂→酶激活作用；抑制剂→酶抑制作用；可以是外源物，也可是自身代谢物。1、酶激活作用与抑制作用微生物代谢中，普遍存在酶既有激活作用又有抑制作用的现象。如：天门冬氨酸转氨甲酰酶受ATP激活，受CTP抑制（终产物）。大肠杆菌糖代谢过程中，许多酶都有激活剂和抑制剂（表5-1）。共同控制糖代谢。2、酶活性调节的机制①变构调节理论：变构酶基础上提出，酶有催化和变构调节位点。酶的多个亚基，多相同，

3、也可不相同。②化学修饰调节理论：变构酶与某物质共价结合而提高或降低活性。如：柠檬酸裂解酶的乙酰化。乙酰-酶+柠檬酸柠檬酸-S-酶+乙酸柠檬酸-S-酶乙酰-酶+草酰乙酸三、酶合成的调节酶活性调节：细，快；酶量调节：粗，慢。1、酶合成的诱导作用诱导酶的合成需要诱导剂，它可是底物，也可是底物的结构类似物。一种酶可有多种诱导剂，其能力与诱导剂的种类和浓度有关。2、酶合成的阻遏某种代谢物积累除抑制酶活性外，还可反馈阻遏酶合成，降低反应速度。①末端产物阻遏：常普遍存在与氨基酸、核苷酸生物合成途径中。②分解代谢物阻遏：如：“葡萄糖效应”。其代谢物阻遏“缓慢利用能源”酶的合成。3、酶合成

4、调节的机制操纵子模型：在DNA分子的不同区段上至少有四种基因，即调节基因R（编码阻遏物）、操纵基因O（阻遏物结合、控制结构基因）、启动基因P（RNA聚合酶结合位点）和结构基因S（转录mRNA）。操纵基因、启动基因和结构基因又构成了操纵子。3、酶合成调节的机制①单一效应物调节：负调节：调节基因R的产物阻止转录进行。如：大肠杆菌乳糖操纵子；正调节：R基因的产物在诱导物存在下，成为转录激活剂。如：阿拉伯糖操纵子。②两种效应物的共同调节：乳糖操纵子的效应物（如：乳糖）和活化蛋白（如：CRP）的调节。③弱化调节：大肠杆菌色氨酸合成操纵子的R、O、P远离S，除阻遏调节外，有弱化调节方式。

5、四、分支生物合成途径的调节1.同功酶调节：催化相同反应，但酶分子结构有差异；2.协同反馈调节：一个不能少；3.累加反馈调节：按比例累加，无协同效应，无拮抗作用；4.增效反馈调节：1+1＞2；5.顺序反馈调节：按①→②→③顺序逐步抑制；6.联合激活或抑制调节：途径产物各自调节，同一中间产物7.酶的共价修饰：一酶两形式，活力有差异，关键在有无共价连接物（腺苷酰基）。五、能荷调节细胞的能荷计算式：[ATP]+1/2[ADP]能荷=——————————[ATP]+[ADP]+[AMP]能荷高时，ATP的酶合成系统受抑制，ATP消耗酶系统被活化。呈抑制与活化的中间状态的能荷大约是0.8

6、5，此时两种酶系统达到平衡。六、代谢调控根据代谢调节理论,通过改变发酵工艺条件(温度、PH、风量、培养基组成)和菌种遗传特性，达到改变菌体内的代谢平衡，过量产生所需产物的目的。1.发酵条件的控制2.改变细胞透性3.菌种遗传特性的改变1.发酵条件的控制①各种发酵条件对微生物的影响同菌种，同培养基，培养条件不同，可获不同代谢产物（途径不同）。啤酒酵母，用葡萄糖，中性产乙醇，酸性产CO2，碱性产甘油。②使用诱导物可用底物或底物类似物有效增加诱导酶的产量。③添加生物合成的前体加前体，避开受抑制酶，大量合成终产物。④培养基成分和浓度的控制速效碳、氮源可能引起分解代谢阻遏。应与迟效碳、氮

7、源适量搭配。2.改变细胞透性培养基中加改变细胞透性物质，利于产物分泌，避免反馈抑制。如：1-5ml/L生物素控制膜中脂质合成；青霉素抑制肽聚糖中肽链交联；土温80或阳离子表面活性剂使壁中脂类流出；控制Mn2+、Zn2+浓度干扰膜、壁形成；筛选透性突变株。3.菌种遗传特性的改变营养缺陷型突变株；如：利用谷氨酸棒状杆菌营养缺陷型（转氨甲酰酶缺陷）突变株生产鸟氨酸。抗反馈调节突变株；组成型突变株；抗性突变株。七、次级代谢与次级代谢调节主要包括：抗生素、刺激素、生物碱、维生素、色素、毒素等。1.初级代谢和次级代