常用样品的种类讲解学习.ppt

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1、常用样品的种类供测定用血样的采集：动物实验时，可从动脉或心脏取血；对与患者或志愿者，采取静脉血（或用毛细管采血）。血浆的制备：将采取全血置于含有抗凝剂（如肝素、草酸盐、EDTA等）的试管中，混匀后，以2500～3000r/min离心5min使血浆与血细胞分离，上清液为血浆。血清的制备：将采取全血在室温下放置0.5～1小时，待血液凝固后，用细玻棒剥离血饼，以2000～3000r/min离心5～10min，上清液为血清。药物与纤维蛋白几乎不结合，血浆与血清中的药物浓度测定值通常是相同的。但血浆比血清分离快，且制取的量多，所以血浆较血清更常用。血样采取后，应及时分离血浆

2、或血清，并立即进行分析。如不能立即测定，应置于具塞硬质玻璃管或聚乙烯塑料离心管中密塞保存。短期保存时，可置于冰箱冷藏（4˚C）；长期保存需在-20˚C或-80˚C下冷冻贮藏。唾液由腮腺、额下腺、舌下腺和口腔粘膜内腺体分泌液混合组成的。口腔粘膜受化学刺激，各唾液腺的分泌会受到影响，造成唾液组成发生较大变化。唾液的采集：在安静状态下进行，漱口后15分钟收集；采集后立即除去泡沫，并以3000r/min离心10分钟，取上清液分析。若分泌量少，可转动舌尖促进唾液分泌，也可采用物理的（如嚼石蜡）或化学的（如酒石酸）方法刺激。但经刺激后唾液中的药物浓度会受影响。唾液采集后，应在

3、4˚C以下保存。尿液其主要成分：水、含氮化合物（大部分为尿素）及盐类。体内药物（原型或代谢物及其缀合物）的清除主要通过尿液排出。尿液中药物浓度高，采集方便、且采集量大。但尿液浓度变化较大。尿液中药物浓度的改变不能直接反应血药中的浓度。尿液测定主要用于药物剂量回收，尿清除率、生物利用度、以及药物代谢及其代谢途径、类型、速率等的研究。采集的尿液是自然排尿。测定尿中药物的总量时，应收集用药后的一定时间内（如8h、12h或24h）排泄的全部尿液，记录体积后，量取一部分用于药物浓度的测定，在乘以尿量求得排泄总量。肾功能不良者不宜采集尿样。尿液采集后应立即测定，否则应加入防腐

4、剂后置于冰箱中保存。常用防腐剂：甲苯、二甲苯、三氯甲烷，以及醋酸、盐酸等。二、生物样品分析前处理技术**生物样品的前处理应主要考虑生物样品的种类、被测药物的性质和所采用的测定方法。依据生物样品类型：血浆或血清需除蛋白，使药物从蛋白结合物中释出。唾液样品应采用离心去除粘蛋白。尿液样品常采用酸或酶水解药物使从缀和物中释出。依据被测药物的结构及性质，以及存在形式：药物的酸碱性与溶解性涉及药物的萃取手段。是否具有挥发性涉及能否采用气相色谱法测定。光谱特性及官能团性质涉及是否需要制成衍生物。浓度大的样品对前处理要求低，浓度越低的样品对前处理要求越高，依据所采用的测定方法：纯

5、化程度与所采用的测定方法的专属性、检测系统对不纯样品污染的程度密切相关。放射免疫测定法具有较高的灵敏度和专属性，生物样品只需经初步处理除去主要干扰物即可测定。高效液相色谱法要求除去生物样品中的蛋白质，以防止蛋白质等物质在色谱柱上沉积。蛋白质的去除原因：除去蛋白质可使蛋白质结合型的药物释放出来。避免溶剂萃取过程中的乳化现象。保护仪器性能（如保护HPLC柱不被玷污），延长使用寿命。方法：加入与水混融的有机溶剂有机溶剂使蛋白质凝聚，释放与之结合的药物。常用有机溶剂：乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃。含药物的血浆与有机溶剂的体积为1:(1～3)时，可除去90%以上的蛋白质。加入

6、中性盐中性盐使溶液离子强度发生变化，将与蛋白质结合的水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。常用中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐加入强酸当溶液的pH低于蛋白质的等电点时，以阳离子形式存在的蛋白质可与酸根离子形成不溶性盐而沉淀析出。含药物血清与强酸比例为1:0.6混合，可除去90%以上蛋白质。常用强酸：10%三氯醋酸、65%高氯酸、5%偏磷酸。过量的三氯醋酸经加热分解为三氯甲烷和二氧化碳而除去。过量的高氯酸可用碳酸钾、醋酸钾、氢氧化钠等中和后，加乙醇使之生成高氯酸钾（或钠）沉淀除去。偏磷酸可用同法去除。加入含锌盐及铜盐的沉淀剂当pH高于蛋白质的等电点时，蛋

7、白质分子中带负电荷的羧基与金属阳离子形成不溶性盐而沉淀。含药物血清与沉淀剂比例为1:2混合。常用沉淀剂：CuSO4-Na2WO4、ZnSO4-NaOH。酶解法测定某些与蛋白质结合牢固、且对酸不稳定的药物时，需用酶解法使蛋白质分解而释放出药物。常用酶：枯草菌溶素（适用pH：7.0～11.0，温度：50～60˚C）。缀合物的水解原因：含羟基、羧基、氨基和巯基的药物可与内源性物质葡萄糖醛酸或硫酸形成葡萄糖酸酐或硫酸酯缀合物。缀合物较原型药物具有较大的极性，不易被有机溶剂萃取。尿中药物多数呈缀合物状态，测定之前，需将缀合物中的药物释放出来。方法：酸水解：加入适量的盐酸溶液

8、进行水解。