分光光度法与血糖测定ppt课件.ppt

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1、实验报告：20%实验操作考试：30%理论考试：50%预习报告实验报告实验一分光光度计的使用、血糖浓度测定1.实验目的1.1掌握分光光度计的原理及使用1.2掌握刻度吸管的使用1.3熟悉葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度原理及使用2.分光光度法(spectrophotometry)根据物质对光的选择性吸收及光的吸收定律，而建立的一种定性、定量分析的方法。2.分光光度法(spectrophotometry)根据物质对光的选择性吸收及光的吸收定律，而建立的定性、定量分析的一种分析方法。溶液单色光、复合光、光的互补单色光复合光光的

2、互补单一波长的光由不同波长的光组合而成的光若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色光，这种现象称为光的互补。蓝黄紫红绿紫黄绿绿蓝橙红蓝绿2.1.1溶液对光的选择性吸收蓝黄紫红绿紫黄绿绿蓝橙红蓝绿溶液的颜色的产生2.1原理2.1.1溶液对光的选择性吸收吸收程度紫蓝青绿黄橙红吸光度A定性分析基础物质对光的选择吸收不同物质吸收光谱不同相同物质吸收光谱相同吸收程度紫蓝青绿黄橙红2.1.2光的吸收定律根据物质对光的选择性吸收及光的吸收定律，而建立的定性、定量分析的一种分析方法。溶液

3、透光率（透射比）Transmittance透光率定义：T取值为0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%入射光I0透射光It2.1.2光的吸收定律吸光度Absorbance吸光度定义：A取值为0~无穷大朗伯—比尔（Lambert-Beer）定律当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸光度(A)与溶液的浓度(C)和厚度(L)的乘积成正比。它是分光光度法定量分析的依据2.1.2光的吸收定律A:吸光度（absorbance);T:透光率（transmittane)I0:入射光强度;It:透过光强度

4、C:溶液浓度;K:消光系数吸光度与透光率AbsorbanceandtransmittanceT：透光率A：吸光度1.00.50ACA100500T%TT=0.0%A=∞T=100.0%A=0.0A=0.434T=36.8%（1）标准管法:标准液：A标准=K标准C标准L标准待测液：A待测=K待测C待测L待测相同实验条件下，K标准=K待测，L标准=L待测A标准/C标准=A待测/C待测所以：C待测=A待测/A标准×C标准（2）标准曲线法（3）标准系数法应用－待测溶液浓度的测定2.2.仪器组成紫外-可见光度计仪器由光源

5、、单色器、吸收池和检测器四部分组成。分光光度计结构示意图实验器材UV-9100型紫外可见分光光度计（1）开机预热（2）调节波长（3）仪器校正（4）测量2.3操作步骤T=0.0%T=100.0%3.血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）实验原理GOD：葡萄糖氧化酶POD：过氧化物酶/nm颜色互补光400～450紫黄绿450～480蓝黄480～490绿蓝橙490～500蓝绿红500～560绿红紫560～580黄绿紫580～610黄蓝610～650橙绿蓝650～760红不同颜色的可见光波长及其互补光蓝绿实验仪器及试剂仪器：

6、试管，移量管，UV－9100型分光光度计，恒温水浴锅酶酚混合液：葡萄糖氧化酶（GOD）过氧化物酶（POD）4-氨基安替吡啉（4-AAP）苯酚(0.1％）标准葡萄糖溶液：0.2mg/mL待测葡萄糖溶液液实验步骤（1）取10mL试管3支，标号，按下表加入各反应物（单位mL)：加入物空白管标准管测定管待测葡萄糖样品液————0.1葡萄糖标准液——0.1——蒸馏水0.1————酶酚混合液3.003.003.00(2)反应：混匀，37℃保温20min，冷至室温；(3)测量：以空白管调零，500nm波长处测定各管吸光度值（反

7、复读数3次，取均值）；(4)计算：样品葡萄糖含量(mg/mL)=A样/A标×标准溶液浓度。加入物空白管标准管测定管待测葡萄糖样品液————0.1葡萄糖标准液——0.1——蒸馏水0.1————酶酚混合液3.003.003.00移液管和吸量管基本操作注意：选择合适规格的吸量管[实验注意事项]爱护仪器，按规程操作，仪器操作过程出现异常情况，不得私自关闭电源，需由教师指导完成。使用完仪器后，要登记。测量时，不要用手触摸比色皿的光学表面，比色皿外壁必须保持干燥，注意不要将反应液洒入样品室。比色杯必须配套使用，否则将使测试结

8、果失去意义。比色皿每次用完后立即清洗干净，完全干燥后，放回盒中。4.思考题血糖浓度的测定有哪些方法？影响GOD法测定血糖浓度的主要因素有哪些？